La muerte celular inmunogénica como potencial tratamiento alternativo frente a la leishmaniasis

Resum

La leishmaniasis incluye un grupo de enfermedades tropicales desatendidas causadas por protozoos del género Leishmania. Este parásito intracelular ha desarrollado la capacidad de sobrevivir en el interior de las células inmunes del hospedador, evitando así su exposición al sistema inmune. Los tratamientos farmacológicos actuales presentan numerosos efectos adversos y son proclives a generar resistencias, por lo que urge la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas. En los últimos años, la muerte celular inmunogénica (ICD) ha surgido como una terapia prometedora frente a ciertas enfermedades, entre las que destaca el cáncer. Basándonos en esta hipótesis, hemos tratado de imitar el microambiente tumoral al microambiente generado por Leishmania en el interior de las células hospedadoras, con el fin de desarrollar un tratamiento novedoso que eliminara los parásitos intracelulares de Leishmania mediante la activación del sistema inmunitario. La apoptosis es una ruta celular programada dependiente de caspasas que produce la formación de cuerpos apoptóticos que engloban el contenido celular, sin provocar una respuesta inmunológica. La necroptosis presenta características intermedias entre la necrosis y la apoptosis, ya que es una muerte celular programada inmunogénica que implica la ruptura de la membrana celular, pero es independiente de caspasas. Basándonos en esto, hemos inducido distintos tipos de ICD en macrófagos murinos infectados con Leishmania infantum, por irradiación UV o mediante inhibidores de proteínas involucradas en estos procesos. Nuestros resultados mostraron que la viabilidad de los macrófagos a los que se les había inducido ICD era mayor en los que se encontraban infectados con respecto a las células no infectadas. Los patrones moleculares asociados a daño (DAMPs) generados por macrófagos a los que se les había inducido ICD se emplearon como estimuladores de bazos sanos para que, tras su co-cultivo con bazos infectados, generaran una respuesta inmune frente a los amastigotes intracelulares. Se logró reducir la viabilidad de los amastigotes de los explantes infectados cuando las vías inducidas en macrófagos murinos eran la apoptosis intrínseca y la extrínseca. Sin embargo, el proceso necroptótico no generó ninguna respuesta frente a la infección. El proceso de presentación cruzada ha surgido como un mecanismo para combatir inmunológicamente tumores y patógenos intracelulares, como virus o parásitos. Sin embargo, se han descrito diversos mecanismos de evasión de la respuesta inmune por parte de Leishmania, entre los que destaca la alteración de la ruta de presentación cruzada antigénica. Con tal fin, se quiso evaluar el efecto de los DAMPs en la activación de las células dendríticas (DCs) involucradas en el proceso de presentación antigénica y en la proliferación de células T, mediante experimentos de presentación cruzada. Para ello, se crearon las cepas L. infantum 2713 HASPB:OVA y L. infantum 2713 mCh-HASPB:OVA, las cuales expresan la proteína OVA anclada a la cara externa de su membrana plasmática. De esta forma, la estimulación de las DCs por parte de los DAMPs procedentes de células RAW 264.7 inducidas a ICD, junto con la presentación en moléculas MHC-I de antígenos de Leishmania procedentes de lisados de amastigotes de L. infantum 2713 HASPB:OVA, y su co-cultivo con células T específicas de OVA (el hibridoma B3Z o células OT-I), proporciona un método de evaluación de la presentación cruzada al cuantificar la proliferación de células T. Con ello, obtuvimos que los DAMPs generados tras el tratamiento de las células con radiación UV y compuestos que inhiben proteínas antiapoptóticas implicadas en la ruta extrínseca de apoptosis eran capaces de promover un proceso de presentación cruzada antigénica. Tras la realización del fenotipado de bazos infectados con L. infantum 2713 HASPB:OVA, se comprobó que el parásito es capaz de infectar las distintas subpoblaciones de DCs y, además, modificar su frecuencia con respecto a bazos de ratones no infectados.