Efecto del plasma seminal y de las espermadhesinas sobre espermatozoides de verraco

Abstract

Este estudio se realizó con la finalidad de evaluar si el plasma seminal (PS) completo, fracciones del plasma seminal o proteínas presentes en el plasma seminal influyen sobre los espermatozoides de verracos en muestras diluidas. Se utilizaron eyaculados completos en la experiencia 1 mientras que en el resto de las experiencias solo se utilizó fracciones ricas del eyaculado. Cada muestra a procesar se dividió en dos alícuotas. La primera fue destinada a la obtención de espermatozoides, diluyéndolas en BTS hasta una concentración de 3 x 107 esper./ml., mientras que la segunda se utilizó para la obtención de plasma seminal. El PS se extrajo del eyaculado por centrifugación a 3.800 x g durante 15 minutos a 25ºC. El sobrenadante se filtró con filtros de nylon de 30m y 10m de diámetro. Una vez filtrado el PS, o se utilizó en fresco, se almacenó a -20ºC o se liofilizó. La fracción de proteínas que unen heparina (HBP), fue aislada a partir del PS completo por cromatografía de afinidad sobre una columna de heparina-Sepharosa descrita por Sanz et al. (1993). La obtención de las proteínas que no unen heparina (PSP-I/PSP-II) fueron aisladas por cromatografia de afinidad según Calvete et al. (1995). Para la evaluación de las características espermáticas por efecto del PS, el eyaculado se diluyó de nuevo hasta de 3 x 106 esp./ml. La viabilildad fue evaluada con diacetato de carboxifluoresceina y yoduro de propidio, la actividad mitocondrial fue evaluada con Rodamina 123 y, finalmente, la motilidad se evaluó de forma objetiva utilizando un sistema de análisis por ordenador. En algunas experiencias se evaluó la calidad de movimiento mediante el sistema SCA. Los parámetros utilizados fueron la velocidad mediante la velocidad curvilínea (VCL), la linealidad (Lin) y el Dance. En la última experiencia se evaluó la capacidad fecundamente de los espermatozoides mediante el test homólogo de penetración descrito por Martíne