Estudio de la regulación de un gen del metabolismo secundario de "Aspergillus nidulans" mediante el uso de fusiones A lacZ

Abstract

MEDIANTE MUTAGENESIS DE LA UNA CEPA DE A. NIDULANS PORTADORA DE DOS COPIAS DE UNA FUSION DEL PROMOTOR DEL GEN IPNA AL GEN REPORTERO LACZ SE HA IDENTIFICADO Y CARACTERIZADO UNA MUTACION EN UN GEN REGULADOR DE LA TRANSCRIPCION DE IPNA. LA MUTACION, IPNR1, ES RECESIVA, POR LO QUE PRESUMIBLEMENTE IDENTIFICA UN GEN REGULADOR POSITIVO, Y SE HA LOCALIZADO EN EL CROMOSOMA IV DEL HONGO. ESTE ESTUDIO DEMUESTRA LA UTILIDAD DE LOS GENES REPORTEROS PARA EL ANALISIS GENETICO FORMAL DEL METABOLISMO SECUNDARIO. EL ESTUDIO DE LA UNIDAD TRANSCRIPCIONAL DE IPNA PERMITIO LOCALIZAR EL SITIO MAYORITARIO DE INICIACION DE LA TRANSCRIPCION, SITUADO A 106 NT DEL ATG INICIADOR, Y DETERMINAR EL TAMAÑO DEL TRANSCRITO DE IPNA (1260 NT). MEDIANTE ANALISIS FUNCIONAL DEL PROMOTOR DE IPNA SE HAN DETERMINADO CIERTAS REGIONES REGULADORAS. ESTE ANALISIS INDICO QUE LA ACTIVIDAD DEL PROMOTOR ESTA REGULADA MAYORITARIAMENTE POR CONTROLES NEGATIVOS, Y QUE LOS 56 NT ANTERIORES AL SITIO DE INICIACION DE LA TRANSCRIPCION SON SUFICIENTES PARA PRODUCIR UNA ACTIVIDAD PROMOTORA SIGNIFICATIVA. POR ESTE SISTEMA SE HA IDENTIFICADO UNA ZONA DEL PROMOTOR QUE MEDIA (NEGATIVAMENTE) LA REGULACION POR CARBONO. ESTA REGION, QUE SE LOCALIZA ENTRE LOS NUCLEOTIDOS -1334 Y -966 RESPECTO AL SITIO MAYORITARIO DE INICIACION DE LA TRANSCRIPCION, ESTA SITUADA DENTRO DE LA ZONA CODIFICANTE DE ACVA. ASI MISMO, SE HA LOCALIZADO UNA REGION DEL PROMOTOR QUE INTERVIENE EN EL CONTROL POSITIVO POR EL PH AMBIENTAL. ESTE ELEMENTO REGULADOR SE SITUA ENTRE LAS POSICIONES -706 Y -458 RESPECTO AL SITIO MAYORITARIO DE INICIACION DE LA TRANSCRIPCION. EN EXPERIMENTOS DE CAMBIOS DE MOVILIDAD ELECTROFORETICA USANDO EXTRACTOS DE PROTEINA TOTAL SE DETECTA LA UNION ESPECIFICA DE UNA PROTEINA A UN FRAGMENTO DE ADN INTERNO A ESTA REGION. LA FUNCIONALIDAD DE LOS ELEMENTOS REGULADORES DEL PROMOTOR DE IPNA DEFINIDOS EN EL ANALISIS DE DELECION DEPENDE DE LA PRESENCIA EN EL PROMOTOR DE LAS OTRAS REGIONES REGULA