Expresión en vectores eucariontes de genes para vacunación dna por inmersión en el modelo trucha/rabdo virus

Resum

Se ha estudiado la vacunación DNA por inmersión de truchas arco iris (Onchorrynchus mykiss, Walbaum) frente al Virus de la Septicimia Hemorrágica Vírica (VSHV). Se ha utilizado plásmidos codificando la glicoproteína de membrnaa G, bajo los promotores de Cytomegalovirus (CMV) y músculo depex (FG2). El trabajo se ha realizado primero a nivel celular utilizando ensayos de transfección in vitro. Después, con truchas inmunoimcompetentes ( 2 cm), utilizando ensayos de transfección in vivo con plásmidos que contienen los genes marcadores de la proteína verde fluorescente (GFP) y de la b-Galactosidasa (b-Gal). Por último, con truchas inmunocompetentes (5-7 cm), utilizando ensayos de vacunación/contraprueba con plásmidos que codifican la proteína G, seguidos de estimación de la respuesta humoral, celular y resistencia a la comtraprueba. Se ha seleccionado como potencialmente viables como métodos de vacunación por inmersión los ultrasonidos de baja frecuencia, los liposomas DOTAP y la bactofección. La mayor duración de la expresión de GFP en truchas inmunoincompetentes, los mayores niveles de inducción de anticuerpos anti-frg*11 de la proteína G de VSHV en ELISA y la mayor protección (50%) de truchas inmunizadas con el gen de la G se han conseguido mediante vacunación DNA utilizando ultrasonidos de baja frecuencia. Su correlación demuestra el valor predictivo de éstos. Además, se ha aportado evidencia experimental ara una posible sustitución del promotor CMV por FG2, de importancia en la posible comercialización de una vacuna. La continuación de estos estudios a pequeña y a gran escala podría llevar al diseño de un método práctico, económico y efectivo de vacunación de peces por inmersión.