Caracterización de gabuna nueva isoenzima de glutaminasa que actúa como proteína multifuncional

Resumen

La glutaminasa es la enzima que cataliza la reacción de hidrólisis de la glutamina, un aminoácido muy importante sobre todo como fuente de energía y esqueletos carbonados en las células tumorales. Se clasifican en dos tipos: la tipo riñón y la tipo hígado. En humanos existen dos genes para glutaminasa que codifican cuatro transcritos distintos, dos en el cromosoma 2 y otros dos en el 12. Nos planteamos como objetivos la purificación de la primera isoenzima tipo L humana, su caracterización cinética y molecular y analizamos su localización en distintas líneas tumorales humanas. Como resultados obtuvimos la glutaminasa mediante cromatografis de afinidad a través de la interacción con el dominio PDZ de la proteína GIP con el extremo carboxilo terminal de glutaminasa. Esta enzima mostró una baja dependencia por la glutamina, escasa activación por fosfato y amonio e inhibición por glutamato. Estaba localizada tanto en núcleo como en mitocodria del sistema recombinante de baculovirus pero distintos estudios con mutantes de secuencia no nos dieron información sobre los dominios implicados en esta localización. Presentaba tanto un dedo de Zn y dos serinas fosforliadas que pueden estar implicadas en su envio al núcleo. En células tumorales presento también localización nuclear y mitocondrial, en células de cáncer de mama y de hepatoma y que se puso de manifiesto por inmunocitoquimica e inmunotrasferencia western. Encontramos también una fracción de GAB o-glicosilada y demostramos que el PMA, que es un Ester de forbol que induce diferenciación, conseguía aumentar la marca de glutaminasa en núcleo de células de hepatoma y neuroblastoma.