Avances en la producción in vitro e in vivo de embriones porcinos

Resumen

Los objetivos generales de la presente tesis doctoral fueron incrementar la eficiencia de los sistemas actuales de PIV de embriones y la mejora de las técnicas de transferencia de embriones, y estos se concretaron en los siguientes objetivos específicos: (1) analizar la eficacia de dos combinaciones de CPAs: EG+DMSO y EG+PG para la vitrificación de ovocitos sobre los parámetros de viabilidad, fecundación y desarrollo embrionario, (2) evaluar el efecto de tres IRMs: dbcAMP, cicloheximida y cilostamida y sus interacciones con las gonadotropinas sobre la maduración meiótica y el desarrollo embrionario de ovocitos porcinos, (3) determinar los efectos de la adición de AsA, en los medios de maduración, fecundación y cultivo embrionario sobre los parámetros de maduración, fecundación y desarrollo embrionario, así como el efecto de la adición de AsA en los medios de vitrificación sobre la viabilidad después del calentamiento, (4) investigar los efectos del número de partos, la estación del año y el intervalo destete-celo sobre los parámetros embrionarios en día 6 después de la inseminación de donantes superovuladas en el celo post-destete, (5) explorar la posibilidad de re-vitrificar embriones porcinos obtenidos in vivo (6) evaluar la eficacia de los tanques de nitrógeno seco para mantener la viabilidad y la calidad de embriones porcinos obtenidos in vivo y vitrificados durante un periodo de 3 días y (7) investigar en cerdas receptoras como influye el número de partos en su capacidad reproductiva después de la NsDU-ET. Metodología: Para las técnicas in vitro, se utilizó un sistema de producción in vitro de embriones dónde los ovocitos fueron obtenidos de cerdas prepúberes procedentes de matadero. Durante el proceso, los parámetros de fecundación y desarrollo embrionario fueron evaluados. Para la vitrificación y calentamiento de embriones u ovocitos se utilizó el sistema SOPS. En las técnicas in vivo, después de la detección del estro y la inseminación artificial, los embriones fueron recolectados y evaluados. Las transferencias de embriones se realizaron de una manera no quirúrgica. Las conclusiones de la presente tesis doctoral fueron. 1. En ausencia de vitrificación, los efectos tóxicos de los medios de vitrificación sobre ovocitos en estadio de VG fueron mínimos y similares para ambas combinaciones de CPA. 2. Se pueden obtener blastocistos de alta calidad mediante la vitrificación de ovocitos inmaduros. Sin embargo, la tasa de blastocistos fue muy baja y el desarrollo embrionario de los ovocitos vitrificados fue menor comparado con el de los controles. 3. La interacción de las Gns con los tres inhibidores reversibles de la meiosis (dbcAMP, cicloheximida y cilostamida) aceleraron la progresión meiótica hasta el estadio de MII. La presencia de dbcAMP durante la primera fase de la maduración pudo incrementar, incluso duplicar la capacidad de los ovocitos para alcanzar el estadio de blastocisto. 4. La suplementación de medio de IVM/IVF/IVC con AsA (50 µg/mL) no mejoró los resultados de la PIV de embriones. Por el contrario, la adición de AsA a los medios de vitrificación y calentamiento aumentó la supervivencia después de la vitrificación. 5. El número de partos de la donante no afectó las tasas de gestación y de fecundación así como el número y calidad de los embriones de día 6, independientemente de la estación del año (desde otoño a primavera) o del IDC (3 o 4 días). 6. Los blastocistos porcinos derivados de embriones vitrificados y calentados podrían re-vitrificarse con buenas tasas de supervivencia. 7. El DS es un eficiente sistema para almacenar embriones vitrificados durante un periodo de tres días, sin afectar la viabilidad después del calentamiento. 8. Las tasas de gestación y fecundación así como el tamaño de camada no se vieron afectadas por el número de partos de las receptoras después de la transferencia no quirúrgica de embriones.