Mejora de la eficiencia de tecnologías embrionarias porcinas

Resumen

Objetivos: El objetivo general de la presente Tesis Doctoral fue la optimización de dos tecnologías embrionarias en la especie porcina, la producción in vitro de embriones y la transferencia de embriones, mediante el estudio y evaluación de distintos factores que afectan directamente a su eficiencia y aplicabilidad. Para ello, en una primera fase nos centramos en el estudio del aceite mineral (MO) utilizado para cubrir los medios de cultivo en los sistemas de producción in vitro de embriones, lo cual también es aplicable al cultivo de embriones producidos in vivo. En una segunda fase, se estudiaron determinados factores que afectan a la eficiencia de la transferencia de embriones, incluyendo 1) la efectividad de la transferencia quirúrgica y no quirúrgica de embriones vitrificados; 2) la adecuación de un medio químicamente definido y con pH estable como medio básico para la vitrificación y el calentamiento de los embriones; 3) el desarrollo de un procedimiento de conservación de embriones en estado líquido y en ausencia de CO2; y 4) los efectos de los procedimientos para la obtención quirúrgica de embriones y para la transferencia no quirúrgica sobre el futuro reproductivo de las cerdas donantes y receptoras, respectivamente. Métodos: Se han utilizado protocolos establecidos tanto para la PIV de embriones como para la vitrificación y calentamiento de los mismos. Para la conservación embrionaria en estado líquido, los embriones en estadio de mórula se lavaron 10 veces e inmediatamente se conservaron a diferentes temperaturas y en diferentes medios, según el diseño experimental, por un periodo de hasta 72 h. Tras el periodo de conservación, los embriones se cultivaron de forma convencional para evaluar su potencial de desarrollo in vitro o se transfirieron a cerdas receptoras. Para la obtención quirúrgica de embriones y para las transferencias quirúrgicas y no quirúrgicas se han utilizado técnicas puestas a punto por nuestro laboratorio en años anteriores. Conclusiones: Las principales conclusiones de esta Tesis Doctoral son: 1.- A pesar de su pronunciado impacto sobre los niveles de progesterona en el medio de maduración, el uso aceite mineral para cubrir los medios de maduración, fecundación y cultivo embrionario no afecta el patrón de la maduración ni la capacidad de desarrollo in vitro de los ovocitos. 2.- El uso de una cubierta de aceite mineral peroxidado disminuye drásticamente los resultados de la producción in vitro de embriones. Dicha disminución se asocia a los elevados niveles de peróxidos en el aceite, pero no puede explicarse por los niveles de peróxido de hidrógeno ni de especies de oxígeno reactivo transferidas desde el aceite a los medios de cultivo. 3.- El tipo de aceite mineral usado durante la maduración, fecundación y cultivo embrionario afecta a la producción in vitro de embriones, debido, probablemente, a diferencias entre los aceites en la composición de compuestos orgánicos volátiles y en la transferencia de compuestos a los medios de incubación. 4.- La tasa de parto y el tamaño de la camada de las cerdas receptoras sometidas a una trasferencia no quirúrgica de embriones aumentan al aumentar el número de embriones vitrificados transferidos por receptora, llegando a obtenerse una fertilidad similar a cuando se emplea la transferencia quirúrgica. 5.- La vitrificación y el calentamiento embrionario usando un medio químicamente definido y pH estable como medio basal asegura un excelente potencial de desarrollo in vitro y una adecuada fertilidad tras la transferencia quirúrgica de los embriones vitrificados en los estadios de mórula y blastocisto. 6.- Las mórulas conservadas a 37ºC en un medio semi-definido que contenga albúmina sérica bovina mantienen su viabilidad in vitro y su capacidad de desarrollo por un periodo de 72 h. Esos embriones son capaces de desarrollarse en fetos normales al menos hasta el día 38 de gestación. 7.- La obtención quirúrgica de embriones compromete el futuro reproductivo de las cerdas donantes. Por contra, la técnica de transferencia no quirúrgica de embriones no afecta el potencial reproductivo de las cerdas receptoras tras su reintroducción como reproductoras de la granja.