Caracterización del retrovirus asociado con el tumor intranasal enzoótico de la oveja

Resumen

El Tumor intranasal enzoótico de la oveja es una enfermedad neoplásica transmisible. La transmisión experimental del proceso estableció un posible vínculo de la neoplasia con un agente infeccioso. Posteriormente los estudios de microscopía electrónica demostraron la presencia de partículas retrovirales en relación con céluas tumorales en animales seronegativos a lentivirus. Así mismo fue detectada, en extractos de tejido tumoral y fluido nasal, la existencia de actividad enzimática transcriptasa inversa en fracciones de densidad características de retrovirus. En estas mismas fracciones se demostró la presencia de polipéptidos que reaccionaban cruzadamente con otros retrovirus de tipo D y B como son el Mason Pfizer Monkey Virus (MPMV) y el Virus de la adenomatosis pulmonar ovina (JSRV). Conocidas estas relaciones con otros retrovirus y teniendo en cuenta la imposibilidad de propagar el virus en sistemas celulares y la existencia de numerosos retrovirus endógenos ovinos similares a JSRV, y presumiblemente al retrovirus relacionado con el Tumor intranasal enzoótico de la oveja (OvENTV), procedimos caracterizar este agente empleando para ello técnicas de biología molecular. Para ello en primer lugar se emplearon distintos protocolos de PCR desarrollados para la detección de JSRV obteniendo producto amplificado de un fragmento del gen gag. Al clonar y secuenciar dicho producto se comprobó que en esa región OvENTV era diferente de JSRV y de las copias retrovirales endógenas y se demostró la existencia de dos enzimas restricción AatII y PstI que podían ser empleadas como marcadores moleculares de OvENTV. Una vez comprobada la diferente naturaleza de los agentes se procedió a clonar y caracterizar el genoma completo de OvENTV. Para ello se sintetizaron dos genotecas en las cuales se realizaron distintos cribados empleados diferentes sondas marcadas radioactivamente procedentes de diversos clones de JSRV. O