Clonación, caracterización y expresión del Cluster hom-thrB de B. lactofermentum 13869

Résumé

Las corinebacterias se caracterizan por ser microorganismos que excretan al medio de cultivo determinados metabolitos como aminoacidos, nucleotidos, etc. Una de las especies mas representativas del grupo es brevibacterium lactofermentum, que ha sido utilizada como donadora del material genetico objeto de estudio en este trabajo. Se realizo un estudio de los genes que codifican para las enzimas implicadas en la ruta biosintetica del aminoacido treonina en b. Lactofermentum; mediante complementacion de auxotrofias en mutantes de e. Coli y corinebacterias, se pudo identificar la presencia de los genes hom-thrb, los cuales se encuentran formando un "cluster". Los genes anteriores codifican para las enzimas homoserina deshidrogenasa y homoserina kinasa respectivamente; sin embargo no se localizo adyacente a este "cluster" el gen que codifica para treonina sintasa (thrc), aspecto este que si se observa en el operon de treonina de e. Coli. Los genes hom y thrb fueron secuenciados correspondiendo a unos tamaños de 0.9 y 1.3 kb respectivamente; las proteinas codificadas por estos fueron expresadas en e. Coli, y tienen unos tamaños de 46 y 32 kd respectivamente. De la misma forma se realizaron una serie de estudios con los transcritos pertenecientes a este "cluster", y de las señales reguladoras que se localizaron dentro de esta estructura, con el fin de comprobar su funcionalidad en e. Coli.