La subunidad [gamma 2L] del receptor de Gaba[A]inmunodetección y análisis de su distribución en el encéfalo de mamíferos

Resumen

El gaba es el principal neurotransmisor inhibidor. El receptor de gabaa es la diana en el sistema nervioso central para muchos farmacos ampliamente utilizados en terapeutica, como las benzodiacepinas y los barbituricos. Estos receptores son oligomeros compuestos por varios tipos de subunidades. Se han identificado dos formas de la subunidad gamma-2, la corta (gamma-2s) y la larga (gamma-2l), generadas por un procesamiento alternativo del rna. Parece que la forma larga esta implicada en los efectos del etanol sobre el receptor. Nosotros hemos producido anticuerpos contra un peptido sintetico que contiene la insercion de ocho aminoacidos que incluye una secuencia consenso de fosforilacion y que esta presente en la subunidad gamma-2l, diferenciandola de la gamma-2s. Estos anticuerpos son especificos para el peptido y reconocen especificamente una proteina fusion que hemos construido con el principal dominio intracelular de la subunidad gamma-2l, como se ha determinado mediante ensayos elisa y "western blot". En cambio los anticuerpos no reconocen a una proteina fusion que incluye el principal dominio intracelular de la subunidad gamma-2s, que tambien hemos expresado en e. Coli. Usando el suero antipeptido hemos identificado la subunidad gamma-2l en preparaciones de membranas de cerebelo bovino, de rata y de raton, asi como en una preparacion de receptor que hemos purificado a partir de cerebro bovino. Asi, la subunidad gamma-2l del receptor bovino aparece como una proteina de 57 kda, mientras que en rata y en raton es de 49 kda. Estas diferencias pueden ser debidas a distintos grados de glicosilacion. Tambien hemos estudiado la distribucion de la subunidad gamma-2l en el encefalo de rata y de raton, mediante inmunohistoquimica, encontrando que es abundante en el cerebelo y en la corteza cerebral, pero no en el hipocampo. Esta distribucion podria estar relacionada con los efectos diferenciales que ejerce el etanol sobre estas regio