Caracterización, expresión y regulación del locus en el que se encuentra el gen que codifica para la metionina adenosiltransferasa (Gen "MAT2") en el tripanosomátido "Leishmania infantum"

Abstract

En este trabajo se ha caracterizado el locus en el que se encuentra el gen MAT2 que codifica para la metionina adenosiltransferasa (MAT) en el protozoo parásito Leishmania infantum. Al contrario que la MAT de mamíferos, en este microorganismo esta proteína está codificada por dos copias génicas idénticas de 1179 pb dispuestas en tándem cabeza-cola y separadas por una región espaciadora de 3953 pb. El análisis de la secuencia de la región del genoma que contiene el gen MAT2, reveló la existencia de un ORF de 1113 pb precediendo a cada una de las copias de dicho gen. Mediante análisis de Northen se comprobó que el ORF se trataba de un nuevo gen, a cuya secuencia teórica de aminoácidos se le denominó de Northern se comprobó que el ORF se trataba de un nuevo gen, a cuya secuencia teórica de aminoácidos se le denominó LORIEN (Leishmania Open Readingframe Intergenic Expresed Newprotein). La agrupación de genes LORIENI MAT2 se localizó en un cromosoma de 1,5 Mb mdiante la realización de electroforesis en campo pulsado. El origen de transcripción de dicho "cluster" se identificó a través del empleo de ensayos de "run-on" nuclear, en la región situada entre las posiciones -2135/-1446 respecto al codón de inicio de la primera copia del gen LORIEN. Los genes MAT2 y LORIEN se expresan de un modo constituido en promastigotes de L.inantum, existiendo dos transcritos para el primero de ellos (2,3 y 2,6 kb) y un único ARNm para el segundo (2,2 kb). A través de experimentos de Western se comprobó que el ARNm de los genes MAT2 y LORIEN se traducían a una proteína de 49 y 47 kDa, respectivamente. Estos tamaños resultaron ligeramente superiores a los estimados teóricamente a partir de sus respectivas secuencias. A pesar de la poca homología que mostró la proteína LORIEN con el resto de las proteínas de las bases de datos, se vio que contenía un dominio conservado consistente en un dedo de zinc de tipo SP-RING/Miz c