Análisis de la regulación de la expresión del gen pcbAB de "Penicillium chrysogenum", el primer gen de la vía biosintética de la penicilina

Résumé

La Tesis Doctoral se ha orientado al estudio de la expresión del gen pcbAB de Penicillum chrysogenum, el primer gen de la via biosintetica de la penicilina. Este gen codifica la enzima a-aminoadipil-cisteinil-valina sintetasa(ACV sintetasa). La expresión de gen pcbAB se considera el paso limitante de la biosintesis de penicilina. Se cree que en el control de la regulación tanto de pcbAB como de pcbC interviene la zona intergénica situada entre ellos, que sirve como promotor bidireccional para ambos genes. Para determinar las regiones esenciales en la regulación del gen pcbAB se obtuvieron delecciones 5¿consecutivas del promotor pcbAB, las cuales se fusionan con el gen testigo lacZ y se introdujeron en forma de una copia en el locus pyrG en P.chrysogenum npe10 pyrG(mutante no productor de penicilina). El estudio de la expresión del gen pcbAB, usando el gen la lacZ como el gen testigo revelo la existencia de represión por glucosa en todos los transformantes que expresan el gen pcbAB. Asimismo se han seleccionado tres regiones del promotor pcbAB, denominadas cajas A,B y C, cuya delección conduce a una significativa disminución de la expresión del gen pcbAB. Se ha observado la formación de complejos de unión al ADN con las cajas A y B, usando los extractos preparados a partir de los micelios crecidos con glucosa y lactosa. En concreto el complejo AG1, usando la sonda A y los complejos BG1,BG2 y BL1, usando la sonda B. La secuencia de unión involucrada en la formación del complejo AG1 es el heptanucleotido palindrómico TTAGTAA,situado en las posiciones -679 a -673 respecto al sitio de inicio de la transcripción del gen pcbAB. La sustitución de una timina en la posición 1 ó 5 en el heptanucleotido TTAGTAA es suficiente para impedir la formación del complejo AG1 según se observa en ensayos de alteración de la movilidad electroforética (EMSA). El estudio de la expresión in vivo revela que la secuencia TTAGTAA es imprescin