Caracterización de los genes "Blakeslea trispora" implicados en la biosíntesis de ß-caroteno

Resumo

Los objetivos propuestos al inicio de este trabajo de investigación fueron los siguientes: 1. Desarrollo de un programa de selección clásica basado en mutación al azar. 2. Clonación de genes de b. Trispora implicados en la biosíntesis de -caroteno, y/o que presenten una expresión constitutiva. 3. Desarrollo de un protocolo de transformación de b. Trispora. 4. Expresión de genes biosintéticos de -caroteno en m. Circinelloides y b. Trispora. 5. Efecto de la luz sobre la producción de carotenoides en m. Circinelloides y b. Trispora. Se han identificado, clonado y caracterizado los genes acta, carb y carra. El orf del gen acta (1.561 pb) posee 4 intrones, codifica una g-actina, y su región promotora es funcional en e. Coli y a. Chrysogenum. Los genes carb y carra se encuentran ligados en una región de 4,5 kb del genoma de b. Trispora, y se transcriben en sentidos opuestos bajo el control de un promotor bidireccional de 611 pb. El orf del gen carb (1.955 pb) posee 2 intrones y codifica una proteína con actividad fitoeno deshidrogenasa. El orf del gen carra (1.894 pb) posee 1 intrón y codifica una proteína con actividad fitoeno sintasa/licopeno ciclasa. El gen carb de la cepa superproductora de ?-caroteno b. Trispora f-744 posee la mutación a1791c, que origina la sustitución del aminoácido ser presente en b. Trispora nrrl 2457 en la posición 528 por arg presente en f-744 (s528r). El gen carra de la cepa f-744 posee la mutación t497c que origina la sustitución del aminoácido pro presente en nrrl 2457 en la posición 143 por ser presente en f-744 (p143s)). Los genes carb y carra de b. Trispora son funcionales en m. Circinelloides. El gen carb de b. Trispora complementa la deficiencia en la actividad fitoeno deshidrogenasa de la cepa m. Circinelloides ms23, y el gen carra complementa la deficiencia en las actividades fitoeno sintasa y licopeno ciclasa de la cepa m. Circinelloides ms8. La expresión del gen carra de b. Trispora en m. Circi