Vitrificación de ovocitos ovinosvaloración ultraestructural y citofisiológica

Résumé

La criopreservación de óvulos nos ofrece múltiples ventajas con respecto a las congelación de embriones. Sin embargo, se trata de células muy complejas y especializadas con características que dificultan su criopreservación, como su mayor volumen y ciertas propiedades de la membrana. En este trabajo se utilizó la vitrificación para criopreservar ovocitos, método caracterizado por las elevadas tasas de enfriamiento, la utilización de altas concentraciones de crioprotector, y de volúmenes muy pequeños de medio. La vitrificación se hizo por inmersión directa en nitrógeno líquido y utilizando el VitMaster (hasta -210ºC), y como soporte para los ovocitos las pajuelas SOPS. Se vitrificaron ovocitos en VG (VG-VITRIF) y en estado maduro (MIV-VITRIF) procedentes de folículos grandes y pequeños. Los efectos de la vitrificación se determinaron estudiando la ultraestructura y el estado citofisiológico. Tanto ovocitos vitrificados en VG, como maduros presentaron porcentajes muy bajos de maduración nuclear. Cuando la vitrificación se hizo con el VitMaster, los mayores resultados se obtuvieron en ovocitos vitridicados en estado maduro. En el resto de los casos no hubo diferencias significativas. Los microtúbulos del huso meiótico experimentaron un gran daño como resultado de la vitrificación de ovocitos en VG y en estado maduro debido principalmente a una intensa despolimerización. En los dos estados de maduración, los microtúbulos experimentaron un mayor daño que los cromosomas de la placa metafásica. La vitrificación también produjo daños en los microtúbulos de actina, a nivel de la banda de actina y de las proyecciones zonales, especialmente importantes en los ovocitos ovocitos inmaduros ya que intervienen en el proceso de maduración. Sin embargo, el daño fue menor que en la tubulina, ya que aproximadamente un 50% de ovocitos muestran una actina normal. Los ovocitos vitrificados en estado maduro mostraron un daño mayor en la distribución