Brachyspira hyodysenteriaesensibilidad antibiótica y epidemiología molecular - Brachyspira spp. en perros

Resumen

Las espiroquetas del género Brachyspira son bacterias anaerobias que colonizan el intestino de aves y mamíferos. Una de las especies más relevantes de este género es Brachyspira hyodysenteriae, agente etiológico de la disentería porcina. Esta enfermedad afecta especialmente a los cerdos de cebo y se caracteriza, en su forma clínica más clásica, por la presencia de diarrea sanguinolenta. La disentería origina elevados costes económicos en las explotaciones porcinas, derivados sobre todo del aumento del índice de conversión, de la disminución de la ganancia media diaria y del incremento en gastos de medicación. El tratamiento y el control de la disentería porcina se basan principalmente en la utilización de antibióticos. De todos ellos, los que más se han empleado en los últimos años son la tilosina, la tiamulina, la valnemulina y la lincomicina. Recientemente, se ha aprobado el uso de la tilvalosina en España para tratar esta enfermedad. Esta tesis doctoral, basada en cinco publicaciones científicas, describe la sensibilidad de aislados españoles de B. hyodysenteriae a estos antibióticos durante la última década e investiga la base genética de sus resistencias. Asimismo, profundiza en la caracterización fenotípica y molecular de B. hyodysenteriae y en las posibles relaciones epidemiológicas existentes entre distintos clones, con especial referencia a los aislados españoles. Además, se estudió la presencia de espiroquetas del género Brachyspira en perros, tanto por su potencial patógeno en esta especie como por su posible papel de reservorio epidemiológico. Los resultados de esta investigación muestran como la práctica totalidad de los aislados españoles de B. hyodysenteriae son resistentes a la tilosina. Además, la utilización de un análisis de supervivencia, adaptado para la comparación de concentraciones mínimas inhibitorias de aislados pertenecientes a distintos periodos de tiempo, permitió detectar un descenso progresivo en la sensibilidad a la tiamulina y a la valnemulina desde el año 2000. Por el contrario, la sensibilidad de B. hyodysenteriae a la lincomicina no experimentó cambios en los últimos diez años. Se investigaron las bases genéticas de la resistencia antibiótica de B. hyodysenteriae, detectándose que la mutación puntual del nucleótido en posición 2058 del gen ARNr 23S (numerado en relación a Escherichia coli) es responsable de la resistencia a la tilosina y del descenso de sensibilidad a la lincomicina. Además, se asoció la mutación del nucleótido en posición 2032 con un incremento de la resistencia a la lincomicina y a las pleuromutilinas, tiamulina y valnemulina. La caracterización fenotípica de B. hyodysenteriae mostró la presencia en España de aislados negativos a la prueba del indol. La tipificación utilizando polimorfismos de ADN amplificados al azar (RAPD) y un nuevo protocolo de electroforesis de campo pulsado (PFGE) permitió relacionarlos con aislados indol negativos descritos por otros autores en Alemania y en Bélgica con anterioridad. Durante el curso de esta tesis doctoral se desarrolló una técnica de tipificación molecular de B. hyodysenteriae basada en el análisis del número variable de repeticiones en tándem de múltiples loci (MLVA). Esta técnica resultó ser altamente discriminatoria a la vez que retuvo un elevado valor filogenético, destacando por su facilidad de implementación en laboratorios equipados con tecnología de PCR. La tipificación de aislados mediante MLVA mostró la presencia de un mismo clon bacteriano en explotaciones de España, Holanda y el Reino Unido, señalando el importante papel epidemiológico de los cerdos portadores en la transmisión de esta espiroqueta. Además, esta herramienta permitió comprobar la gran diversidad genética de B. hyodysenteriae y evidenció la clonalidad de esta especie bacteriana. Por último, se investigó la prevalencia de espiroquetas intestinales en perros urbanos. Aunque no se detectó la presencia de B. hyodysenteriae, hubo una elevada prevalencia de perros que eliminaron otras espiroquetas intestinales en heces. B. canis fue la más prevalente, sin embargo, B. pilosicoli se asoció con la presencia de diarrea en perros, especialmente en animales jóvenes.