Características cinéticas y de regulación de la isocitrato liasa de "Cephalosporium acremonium"

Resum

Se estudió la isocitrato liasa de Cephalosporium acremonium. Primero fué inducida cuando se utilizaron acetato o acidos grasos como fuente de carbono. El incremento de la actividad específica con respecto al control con glucosa fué superior a un 850 c/o. La glucosa ejerció una inactivación catabólica "in vivo". El proceso de purificación de la ICL tuvo un rendimiento del 7 o/o y un factor de purificación de 583 veces. La enzima resultó ser un tetrámero con una masa molecular de 250 kDa, constituida por subunidades idénticas. Se determinaron las características físicoquímicas. En cuanto las características cinéticas, la ICL siguió una cinética de Michaelis Menten con respecto al verdadero sustrato, el complejo Mgisocitrato. En la reacción de rotura, los iones Mg se comportan como activadores no esenciales de tipo mixto lineal. El mecanismo es compatible con un mecanismo ordenado UniBi, en el que el succinato es el primer producto liberado. La enzima fue inactivada mediante modificación oxidativa por un sistema FeII ascorbato dependiente de oxigeno. La oxidación se produce a través de la reacción de Fenton, generando especies activadas del oxigeno. El análisis de la pérdida de actividad indica que el sistema actúa mediante la oxidación de residuos de citeína localizados en la región del centro de unión del sustrato. El dietilpirocarbonato inactivó a la enzima, siguiendo un mecanismo de reacción que se desarrolla por la formación de un complejo no covalente enzimaDEPC. El espectro de absorción de la enzima modificada tiene un solo máximo de absorbancia a 240 nm, característico de la modificación de residuos de histidina. La inactivación completa se obtuvo tras la modificación de 11 residuos de histidina por subunidad, siendo sólo uno de ellos esencial para la catálisis. Mediante estudios de protección de la inactivación por lso sustratos de la enzima, se puede afirmar q