Sistemas redox enzimáticos y análisis de antioxidantes análogos del ascorbato en el hongo filamentoso "Phycomyces blakesleeanus"

Résumé

Los objetivos de este trabajo conllevaban el estudio y caracterización de sistemas redox de membrana plasmática y de la biosíntesis de reductantes análogos del ascorbato en el hongo filamentoso Phycomyces blakesleeanus. El trabajo realizado nos llevó a determinar una actividad ferricianuro reductásica de membrana plasmática, que requiere NADH intracelular y que es la responsable de la reducción extracelular de ferricianuro por P. blakiesleeanus. Dicha actividad es modulada en respuesta a niveles intracelulares de hierro, probablemente mediante un proceso de activación o amplificación, siendo negativamente regulada por hierro y cobre. Esta reductasa parece estar involucrada en la toma de hierro, pudiendo constituir el primer paso en el transporte de hierro a través de la membrana plasmática del hongo. La reducción de ferricianuro extracelular está acoplada con la liberación de protones al medio extracelular. Ambos procesos son activados por vitamina K3, pero en ningún caso son estequiométricos. El efecto diferencial del dietilestilbestrol y el dicumarol sobre la liberación de protones descarta a la ATPasa como responsable de la liberación de los mismos. Los resultados nos llevan a la conclusión de que la reducción del ferricianuro por la ferrirreductasa de membrana plasmática y la liberación de protones en P.blakesleeanus son procesos diferentes, que aunque acoplados, están regulados de manera independiente. Además, se ha detectado otra actividad redox de membrana plasmática en P. blakesleeanus que se ha caracterizado como AFR reductasa, probablemente implicada en la estabilización extracelular de reductantes tipo ascorbato. Actividades tanto AFR como ferricianuro reductásicas se han detectado y caracterizado en la fracción soluble de este hongo, diferentes de las caracterizadas en membrana plasmáticas. La ferricianuro reductasa soluble participaría en el metabolismo del hierro intracelular y la AFR reductasa