Caracterización molecular, detección y resistencia de mycobacterium avium subespecie para tuberculosis

Résumé

La peratuberculosis, enfermedad crónica que afecta al intestino principalmente en rumiantes, está causada por Mycobacterium avium sbsp.paratuberculosis (Map), bacteria supuestamente también involucrada en la enfermedad de Crohn. En esta tesis se presentan 5 estudios relacionados con aspectos bacteriológicos de Map. En el primero se demuestra la circulación de DNA de Map en sangre de vacas y ovejas por medio de PCR, técnica que se compara con el ELISA, y su potencial uso en el diagnostico de la paratuberculosis. En el segundo y tercer estudios, se prueban varios métodos de caracterización e identificación de cepas de Map y se aplican a una colección importante de aislamientos de Map. La combinación de IS1311-PCR-REA y IS900 PCR es una buena estrategia de identificación y tipado rápido para Map. Todos los aislados bovinos son de tipo C, así como algunos de ciervo, jabalíes y unos pocos de pequeños rumiantes. El resto de pequeños rumiantes está infectado con cepas S. Se han descrito 32 nuevos perfiles SnaBI-SpeI-PFGE, y el análisis de similitudes ha agrupado las cepas en dos grandes grupos acordes con los tipos C y S. Existe gran homogeneidad genérica entre aislados bovinos, pero entre pequeños rumiantes éstos son mucho más heterogéneos. En el cuarto estudio hemos detectado la presencia de la secuencia específica de Map en aislados de M.avium procedentes de pacientes de sida, lo que implica posibles interferencias en estudios sobre la enfermedad de Crohn basados en la detección de Map por IS900 PCR. El uso de sondas complementarias permite identificar correctamente estas micobacterias. En el último estudio, conocida la preocupación en torno a la relación Map-Crohn, se planteó el uso de métodos de esterilización alternativos a los térmicos para inactivar Map en leche destinada al consumo humano. Por medio de altas presiones hidrostáticas (HHP), se consiguieron reducciones comparables a las obtenidas por medio de pasterización, con