Función de p73 y ERK en modelos de diferenciación neuronal "in vitro"

Abstract

Las enfermedades neurodegenerativas constituyen junto con las enfermedades circulatorias y el cáncer , las causas mas importantes de muerte de la población de paises desarrollados. Las alternativas existentes para combatir estas alteraciones incluyen la administración de fármacos que impiden la muerte neuronal y las terapias de neurorregenración. En la actualidad, el conocimiento de los programas moleculares que controlan los mecanismos de neurogénesis, así como el desarrollo de modelos celulares in vitro que permitan el estudio de los mismos y faciliten la búsqueda de nuevos fármacos, es de vital importancia para la futura utilización de terapias regenerativas de forma segura y efectiva. Los objetivos de este trabajo de investigación fueron los siguientes: -Establecer y estudiar un modelo de diferenciación neuronal humano. -Estudio de la función de la cascada de MAPK en diferenciación neuronal. -Establecimiento y estudio de un modelo de diferenciación neuronal a partir de células troncales neurales adultas. En el trabajo de esta tesis doctoral se desarrollo un método de diferenciación neuronal a partir de células de teratocarcinoma humano NTera2. Este método, alternativo al descrito por Cheung et al., 1999 incluye unas perlas Cytodex(r) de manera que las células NTera2 con capaces de diferenciarse bajo tratamiento con el inductor Acido Retinoico a verdaderas neuronas postmitóticas. La gran cantidad y calidad de las neuronas obtenidas permite realizar estudios bioquímicos y moleculares en este sistema. De esta manera, comprobamos que las neuronas expresaban marcadores neuronales comos son las proteínas asociadas a microtúbulos Map2, Tau, NF-H, enzimas implicadas en la síntesis de dopamina como Tirosina hidroxilasa y receptores de glutamato GluR. Se estudió la cinética de expresión de factores de transcripción implicados en el proceso de diferenciación neuronal como Nanog, NeuroD, Math1 y Mash1. También se analizó la exp