Sistemas de captacion de hierro en Haemophilus parasuis

Resumo

El hierro es un elemento esencial para la supervivencia de los seres vivos y su disponibilidad limitada en el hospedador natural conlleva a la búsqueda, por parte de los microorganismos, de sistemas eficientes de captación que constituyen potenciales factores de virulencia. Hasta la fecha, existían dudas acerca de los posibles mecanismos de captación de hierro en H.parasuis, especulándose acerca de las proteínas de unión a transferrina o a sideróforos como mecanismos potenciales de adquisición de hierro en esta especie bacteriana. Continuando con el trabajo desarrollado en nuestro laboratorio en relación a los genes que codifican para las proteínas de unión a transferrina en H.parasuis, en esta Tesis Doctoral se ha demostrado la presencia de las proteínas de unión a transferrina TbpA y TbpB en esta especie. Al igual que sucede en otra especies de la familia Pasteurellaceae, H. parasusis posee adyacentes a los genes tbpB y tbpA otros tres genes, tonB, exbD, que posiblemente intervengan en el aporte energético necesario para la captación e internalización del hierro. Los cinco genes se disponen en la misma región con un promotor que se localiza al inicio del gen tonB y que se superpone con una caja Fur implicada en la regulación del sistema de cpatación de hierro en virtud de la concentración de este elemento presente en el medio. Con el fin de caracterizar una de las proteínas receptoras de transferrina, se produjeron dos proteínas de fusión, una de ellas dirigida contra los extremos amino y carboxilo de la protena TbpB (GST-TbpB), y la otra contra el extremo N-terminal de la proteína TbpB (TbpB-His). Se estudiaron las condiciones de expresión de ambas proteínas, purificándose la construida frente al extremo N-terminal de la proteína TbpB. Se obtuvo un panel de 3 anticuerpos monoclonales frente a la proteína de fusión GST-TbpB y 11 frente a la proteína de fusión TbpB-His tras la inmunización en ratones