Estudio de la respuesta al estrés por ph en "Corynebacterium glutamicum" ATCC 13032caracterización de promotores inducibles por la variación del PH extracelular

Resumen

Esta memoria recoge los resultados obtenidos en el estudio sobre la respuesta al estrés por pH en C. glutamicum, permitiendo así tener un conocimiento más amplio de promotores regulados por un cambio de pH. La importancia de este trabajo reside en el gran interés existente por el estudio de promotores regulables, ya que pueden ser utilizados biotecnológicamente para expresar a voluntad (en este caso concreto, en función del pH del cultivo) genes que sean acoplados a estos promotores. Así, se describe por primera vez a Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 como un microorganismo alcalófilo, apoyado por un fenómeno de adaptacion al pH observado cuando se utilizan cultivos a pH 9.0 como inóculos para iniciar cultivos a pH 10.0. En el proteoma citoplasmático y de membrana de C.glutamicum WT a diferentes concidiciones de pH se apreció cómo 21 proteínas presentaban variación en su expresión. Se ha observado la existencia de un posible mecanismo de regulación a pH básico en el que estarían involucrados la cadena respiratoria y el ciclo de los ácidos tricarboxílicos. De entre las proteínas identificadas se eligió el operón de la F0F1-ATP sintasa de membrana, como candidato para estudiar la inducción de su promotor ante cambios del pH. En el estudio de la expresión del operón atpBEFHAGDC u operón f0f1 (F0F1-ATP sintasa), se observa un transcrito de 7'5 kb y un transcrito monocistrónico de 1'2 kb, estando ambos inducidos a pH 9.0. Se ha caracterizado la región promotora del operón f0f1 identificando un sitio de inicio de la transcripción (TSP), cuyas secuencias consenso para las cajas -10 y -35 parecen indicar una regulación por el factor sH. Mediante Northern con la cepa C. glutamicum ?sigH (cepa delecionada en el gen sigH, que codifica el factor sH), se concluyó que cuando este gen se deleciona se obtienen de nuevo los transcritos de 7'5 y 1'2 kb pero la inducción a pH 9.0 del operón observada anteriormente en ambos transcritos, desa