Estudios sobre la carbamilfosfato sintetasa

Resumen

Utilizando marcado de fotoafinidad con efectores, proteólisis limitada o exhaustiva, técnicas cromatográficas y de secuenciación N-terminal, y mutagénesis dirigida, se ha caracterizado el dominio regulador y se han localizado lugares para efectores en la carbamilfosfato sintetasa de Escherichia coli. Se ha demostrado que el inhibidor UMP se entrecruza a la lisina 992, y que el activador IMP se une también al dominio C-terminal de 20 kDa de la subunidad mayor, fotomarcando la histidina 994. La sustitución de esta histidina por alanina previene el fotomarcado por IMP pero no por UMP, y afecta selectivamente a la regulación del enzima por ambos efectores. También se ha insertado en la región reguladora del enzima de E.coli un lugar de fosforilación para proteína quinasa A, que se encuentra en la carbamilfosfato sintetasa II, pero este cambio no ha resultado en la fosforilación por la quinasa del enzima de E.coli modificado así, ni ha afectado sus propiedades reguladoras. Sobre la base de estos resultados y del alineamiento de secuencias de las carbamilfosfato sintetasas, se propone una zona de la secuencia como lugar de unión de los efectores, determinando los cambios en dicha región la selectividad reguladora de cada carbamilfosfato sintetasa.