Clonación y caracterización de un gen de "Streptomyces griseus" que incrementa la producción de varias enzimas extracelulares, esporulación de diferentes cepas de "Streptomyces" en medio líquido

Resumen

La fosfatasa alcalina es una enzima extracelular producida por las bacterias del genero streptomyces. En la memoria se describe la clonacion de tres genes diferentes de streptomyces griseus, denominados saf, pho1 y pho2, que incrementan la produccion de fosfatasa alcalina. Un fragmento de adn de 1kb, conteniendo el gen saf, ha sido secuenciado. El analisis de su secuencia, combinado con estudios de expresion de diferentes construcciones plasmidicas, sugiere que el gen saf codifica para un pequeño polipeptido de 101 aminoacidos. El gen saf incrementa no solo la produccion de fosfatasa alcalina, sino tambien la de otras enzimas extracelulares como alfa-amilasa, proteasa, lipasa y beta-galactosidasa. El gen saf, cuando se halla en un numero elevado de copias, provoca tambien un retraso en la formacion de pigmentos y esporas por streptomyces. Este gen es el primero clonado de streptomyces que ejerce tales efectos pleiotropicos. Los estudios de hibridacion han mostrado que secuencias analogas al gen saf se hallan presentes en todas las cepas de streptomyces ensayadas, lo que sugiere que puede ser un gen con un importante papel fisiologico en streptomyces. Los streptomicetos, cuando crecen en medios solidos, desarrollan un complejo ciclo de diferenciacion celular que culmina con la formacion de esporas. Es muy poco frecuente que streptomyces esporule en medio liquido. En la memoria describimos las condiciones de cultivo adecuadas para que 5 cepas diferentes de streptomyces formen abundantemente esporas en medio liquido. Los estudios realizados indican que la esporulacion se indujo por la existencia de una caida nutricional desde un medio rico a uno pobre. Tambien se obtuvo una abundante esporulacion mediante el cultivo directo, sin cambiar de medio, en el medio complejo r2ye. En este ultimo medio el factor desencadenante del proceso de esporulacion es la alta concentracion de iones ca++ existente (20 mm). Tambien se aislaron y