Biosíntesis de ácidos polisiálicospurificación y propiedades de la CMP-Neu5Ac sintetasa

Abstract

Escherichia coli k-92 produce 450 ug/ml de acidos polisialicos en un medio definido que contiene xilosa y asparagina como fuentes de carbono y nitrogeno. La sintesis del polimero es maxima a 37 grados c y a un ph de 8,0. Se ha purificado la cmp-neu5ac sintetasa de e.Coli k-235 y e.Coli k-92, mostrando un peso molecular de 88000. Las celulas de e.Coli k-235 tienen una actividad cmp-neu5ac sintetasica maxima a las 20 horas de incubacion a 37 grados c, siendo su vida media de 17 horas. El crecimiento de e.Coli k-92 es de tipo diauxico, siendo maxima la actividad cmp-neu5ac sintetasica a las 15 horas y apareciendo un segundo pico de actividad a las 40 horas. La vida media para esta enzima es de 12 horas. Las energias de activacion calculadas son: 6,29 kcal/mol para las temperaturas altas y 17,36 kcal/mol para las bajas, siendo la temperatura de transicion de 30 grados c. El ph optimo es de 9,5 y la t optima es de 37 grados c. Las constantes de michaelis para el neu5ac son de 26 mm en e.Coli k-235 y 10,4 mm en e.Coli k-92. La cmp-neu5ac sintetasa comienza a ser rapidamente sintetizada cuando las celulas crecidas a 20 grados c se transfieren a 37 grados c y se detiene cuando las celulas crecidas a 37 grados c se transfieren a 20 grados c, lo que sugiere que la temperatura regula la sintesis de esta enzima.