Clonación de la agrupacion génica de biosíntesis de candicidina de "Streptomyces griseus" IMRU 3570 y caracterización parcial de la misma

Abstract

Se construyo una cienoteca de s.Ariseos imru 3570 en el codigo supercos 1 y se rastreo con un fragmento interno al gen pabab. Se obtuvieron 2 clones positivos a partir de los cuales, por "chromosome walking" se clonaron 200 kpb, de las que 40 kpb se secuenciaron. El analisis de la secuencia revele 13 orfs, algunas de las cuales pueden estar implicadas en la biosintesis de candicidina, un antibiotico antifungico, macrolido, polieno y aromatico. A los productos deducidos de estas orfs se les asignaron las siguientes funciones: Proteinas reguladoras (ort1,ort2 y ort3), glucosiltransferasa (cang), tioesterasa previamente descrita y delimitada en este trabajo (cant), para sintasa previamente descrita y estudiada por criado et al. (1993), dos polipeptidos de una pks de tipo i. La extension de la dks de tipo i se determino por hibridacion con el gen erya ii de sac. Erytraea, obteniendose un fragmento de hibridacion positiva de 126 kpb. Se secuenció un fragmento paei de aproximadamente 1 kpb y se identificaron 2 orfs: Un polipeptido de una paei alberaria el otro limite de la pks de candicina. La interrupción del gen pabab dio lugar a la cepa s.Arijew abc28 que no produce candicina. Esta cepa conduce su metabolismo a la produccion de un compuesto con actividad antifongica. Cuando se adiciona paba, se restablece la produccion del antibiotico candicina. Los genes cang,cana y pabab presentan transcritos monocistronicos y bi-o policistronicos en medio de produccion de candicidina (medio spg) y en medio lechevalier. Cuando se adiciona fosfato 10mm al medio lechelalier no se detectaron transcritos para los genes estudiados. En la eona intergenica corriente arriba de cang y cana se detecto un inicio de transcripcion en cada caso. En la intergenica corriente arriba de pabab se detectaron dos inicios de transcripcion y un tercero en la eona 31 del gen situado corriente arriba de pabab x transcrito en la misma direccion.