Control de la expresión de los genes de biosíntesis de cefamicina C en "Streptomyces clavuligerus" por la proteína CcaR

Zusammenfassung

El gen ccaR se ha descrito como regulador positivo de la biosíntesis de cefamicina C y ácido clavulánico en Streptomyces clavuligerus (Pérez-Llarena y col., 1997). Perteneciente a la familia de proteínas SARP, que controlan la biosíntesis de antibióticos en varias especies del mismo género, la proteína CcaR codificada en este gen, presenta homología con reguladores específicos de la biosíntesis de antibióticos en otras especies de estreptomicetos, los cuales realizan su función activadora mediante uniones específicas a regiones promotoras de las agrupaciones biosintéticas correspondientes (Arias y col., 1999; Stutzman-Engwall y col., 1992). El trabajo realizado supone la caracterización de esta actividad reguladora, a través de la purificación de la proteína CcaR y siguientes estudios in vitro e in vivo. En los estudios in vitro, se han llevado a cabo experimentos de unión ADN-proteínas y posterior resolución en geles no desnaturalizantes (técnicas EMSA) determinándose la unión de la proteína a dos regiones promotoras de la agrupación génica de biosíntesis de cefamicina C: el propio promotor génico de ccaR y una región de actividad promotora bidireccional situada entre los genes biosintéticos cefD y cmcI. No se han podido detectar uniones con las regiones promotoras analizadas pertenecientes a la agrupación de biosíntesis de ácido clavulánico, lo que no descarta una regulación directa de CcaR sobre esta ruta biosintética, aunque también podría ejercer su regulación a través de un factor transcripciona adicional. El carácter activador de las uniones detectadas entre CcaR y las regiones promotoras de ccaR y cefD-cmcI, se ha determinado a través de los ensayos in vivo realizados mediante fusiones transcripcionales de los promotores analizados al gen testigo xylE. A través de estos ensayos se concreta una autorregulación positiva ejercida por CcaR sobre la transcripción del gen que la codifica