Aislamiento y analisis de genes codificadores de quitina sintasas en mucor circinelloides

Résumé

Se han aislado 3 genes codificadores de quitina sintasas en el hongo filamentosos m. Circinelloides. Y se han analizado, parcial o integramente, su estructura nucleotidica y la expresion en las diferentes fases de crecimiento de este hongo (miceliar y levaduriforme). El gen chs1 se ha secuenciado completamente. La region estructural presenta 5 intrones cuyo procesamiento da lugar a unica fase de lectura que codifica un polipeptido de 852 aminoacidos. Se ha demostrado que su maxima expresion se produce a las 20 h de crecimiento miceliar, mientras que en la fase levaduriforme no se detecta expresion. Este gen es capaz de expresarse en saccharomyces cerevisiae, bajo el control de un promotor autoctono; la correspondiente enzima presenta una actividad quitina sintasica reducida y requiere mg2+ como cofactor. Se han analizado secuencias parciales de los genes chs2 y chs3, comprobandose que presentan un elevado grado de homologia con genes equivalentes de otros organismos. No se han detectado transcritos en analisis northern, aunque chs3 se ha detectado mediante rt-pcr. Asimismo, se ha obtenido la ubicacion cromosomica de los genes chs1 y chs2 en diferentes estirpes de m. Circinelloides, mediante separacion electroforetica de los cromosomas e hibridacion con sondas de estos genes.