La tecnica de la visualización de diferencias de la expresión génica(ddrt-pcr) aplicada a mucoralesfotorrespuestas de phycomyces blakesleeanus y dimorfismo de mucor circinelloides

Resumo

La técnica DDRT-PCR ha permitido aislar dos fragmentos de ADNc que muestran expresión diferencial en Phycomyces blakesleeamus en respuesta a la luz. Estos fragmentos no muestran homología significativa con ninguna secuencia de las bases de datos. Se han aislado también mediante esta técnica cuatro fragmentos de ADNc que muestran patrones de expresión diferentes en las formas de crecimiento de levadura, transición y micelio de Mucor circinellides. El fragmento ddT67 hibrida con un transcrito presente en la fase de transición de levadura a hifa y ausente en la fase miceliar, y posee una alta semejanza con genes codificantes de ornitina descarboxilasas (ODCs). Se han aislado y secuenciado el ADNc y la copia genómica del gen ocdA de M. Circinelloides. La proteína deducida de la fase de lectura abierta muestra una gran semejanza con otras ODCs. Se ha puesto a punto el método de análisis de extensión del cebador automático no radiactivo. Se han determinado mediante este método cuatro sitios de inicio de la transcripción en el gen odcA. El gen odcA se expresa diferencialmente durante la transición de levadura a hifa. La máxima acumulación del transcrito se produce a los 120 min de crecimiento aerobio. Este transcrito es indetectable a las 30 h de crecimiento miceliar en la estirpe CBS227.49. Este patrón de expresión difiere del observado en otros hongos dimórficos, en los que los niveles del mensajero no cambian druante la transición. La actividad ODCásica es superior en la fase de transición que en la de levadura o micelio, lo que se correlaciona con el aumento del nivel de transcrito durante la transición. La regulación transcripcional observada durante la transición,junto con la ausencia de regiones PEST en esta proteína, y la localización celular propuesta, podrían reflejar un mecanismo diferente de regulación de los niveles de ODC en este organismo,en comparación a otros hongos.