Clonacion y caracterizacion de dos peptido sintetasas de trichoderma harzianum. Aproximacion genomicca a la busqueda de genes de trichocerma spp en condiciones de biocontrol

Resumen

Esta Tesis Doctoral contiene cuatro capítulos independientes. I. Estudio de la actividad antibiótica de cepas de Trichoderma. Se llevó a cabo un estudio de la actividad antibiótica de 24 cepas de distintas especies de Trichoderma sobre un panel de 20 microorganismos diana. Se encontró una gran variación entre las actividades detectadas, no existiendo una correlación clara entre una determinada especie de Trichoderma y el patrón de antibióticos que producía. II. Identificación de peptaiboles, clonación y caracterización de dos péptido sintetasas de T. harzianum. En primer lugar, se identificaron los peptaiboles que producían diferentes especies de Trichoderma. Después, usando diferentes estrategias, se llevó a cabo la clonación parcial de los genes salps1 y salps2 en la cepa T. harzianum CECT 2413, que codifican sendas péptido sintetasas. salps1 parece ser un pseudogen. Mediante un exhaustivo análisis de la secuencia, se formulan hipótesis sobre la posible función de estos genes. III. Clonación y caracterización del gen ThPTR2 de T. harzianum. Utilizando una estrategia basada en la generación de ESTs, se identificó, clonó y caracterizó el gen ThPTR2 de la cepa T. harzianum CECT 2413, que codifica un transportador de oligopéptidos de la familia PTR. Se realizó tanto una sobreexpresión homóloga como heteróloga del gen y los ensayos de actividad confirmaron la actividad prevista. Es el primer transportador de este tipo que ha sido estudiado en hongos filamentosos. IV. Clonación y caracterización del gen chit101 de T. atroviride. Usando la misma estrategia anterior, se identificó, clonó y caracterizó el gen chit101 de la cepa T. atroviride T11. chit101 codifica la primera quitinasa de tipo "vegetal" estudiada en Trichoderma. Se realizó sobreexpresión homóloga del gen y se realizaron ensayos de actividad quitinasa, que confirmaron esta actividad.