Caracterización y detección molecular de cepas de colletotrichum causantes de antracnosis en fresa. Búsqueda de proteasas de trichoderma implicadas en su biocontrol

Résumé

Las especies del hongo Colletotrichum son las responsables de la antracnosis de la fresa y causan importantes pérdidas económicas en el sector. En la Unión Europea, C.acutatum es considerado un patógeno de cuarentena. En EE.UU., la enfermedad también es producida por C.fragariae, que se considera una variedad virulenta de C.gloeosporioides (estado asexual de Glomerella cingulata), del que es indistinguible en términos morfológicos. En este trabajo se lleva a cabo la caracterización, a nivel bioquímico y fisiológico, de 73 cepas de estas especies con el fin de poder diferenciarlas e identificarlas correctamente. Los resultados obtenidos permitieron la división de las cepas en dos grandes grupos, centrados en C.acutatum y C.fragariae/gloeosporioides. A partir de estudios moleculares y de datos de secuencia de las regiones ITS del ADNr se desarrollaron métodos de diagnóstico de C.acutatum y C.fragariae mediante PCR. Esta técnica resultó eficaz en la detección e identificación rápida y fiable de estos patógenos en plantas de fresa todavía asintomáticas. Trichoderma harzianum, es un hongo micoparásito utilizado como agente de control biológico de hongos fitopatógenos. Un mecanismo fundamental del efecto antagonista de Trichoderma es el micoparasitismo, que se basa en la producción de enzimas hidrolíticas que degradan la pared celular fúngica. En este trabajo se lleva a cabo el aislamiento y caracterización del gen pra1, que codifica una proteasa acídica de 28 kDa en T.harzianum CECT 2413. Previamente la proteína se purificó y caracterizó como una enzima tipo tripsina con afinidad por paredes celulares de C.acutatum. Las comparaciones de dos péptidos secuenciados con las bases de datos confirmaron la pertenencia de PRA1 a la familia quimotripsina de las serin-peptidasas, hasta ahora no descrita en Trichoderma. Los ensayos de actividad enzimática y análisis tipo Northern mostraron que pra1 se reprime