Modificación de proteínas por nucleótidos púricos y caracterización de la nucleósido difosfato quinasa de streptomyces coelicolor

Résumé

SE HAN IDENTIFICADO VARIAS PROTEINAS QUE INTERACCIONAN CON GTP EN EXTRACTOS DE STREPTOMYCES COELICOLOR. ENTRE ELLAS, CUATRO SE CORRESPONDEN CON VERDADERAS "GTP BINDING PROTEINS" MIENTRAS QUE SE HA DETECTADO UNA PROTEINA DE 43 KDA QUE SUFRE UN PROCESO DE MODIFICACION COVALENTE POR GUANILILACION. ESTE PROCESO ES AUTOCATALITICO SIENDO EL RESULTADO DE LA UNION DE GMP A PARTIR DE GTP Y LIBERANDOSE PIROFOSFATO. LA MODIFICACION DE LA PROTEINA ES ESTABLE A BAJAS TEMPERATURAS, ACIDO LABIL Y PRESENTA UN PUNTO ISOELECTRICO DE ALREDEDOR DE 5'5 CON VARIAS FORMAS MODIFICADAS. PARALELAMENTE SE HAN IDENTIFICADO, AL MENOS, TRECE PROTEINAS QUE PARECEN SUFRIR PROCESOS DE FOSFORILACION A PARTIR DE GTP. POR OTRO LADO, SE HA PURIFICADO Y CARACTERIZADO LA NUCLEOSIDO DIFOSFATO QUINASA (NDPK) DE S. COELICOLOR, COMPROBANDOSE QUE SE TRATA DE UNA ENZIMA TRIMERICA CON SUBUNIDADES DE 16 KDA. ESTA ENZIMA CATALIZA UNA REACCION BISUSTRATO QUE SIGUE UN MECANISMO PING-PONG CARACTERIZADO POR LA FORMACION DE UN COMPLEJO INTERMEDIARIO FOSFORILADO EN UN RESIDUO DE HISTIDINA. ADEMAS, EXISTE UNA FOSFORILACION EN UN RESIDUO DE SERINA QUE REPRESENTA ALREDEDOR DEL 9% DE LA FOSFORILACION TOTAL. DURANTE LA PURIFICACION DE LA NDPK SE HA DETECTADO UNA ASOCIACION ENTRE ESTA ENZIMA Y LA SUCCINIL COENZIMA A SINTETASA DE S. COELICOLOR.