Análisis de secuencias de ADN ribosómico en berberechos y mejillones de la costa europea

Resumen

En este trabajo se llevó a cabo la caracterización molecular de la unidad de repetición del ADNr 5S y de la región ITS en las especies de berberecho C.edule, C.glaucum y C.lamarcki, y en las de mejillón M.galloprovincialis, M.edulis y M.trossulus. También se realizó la localización cromosómica del ADNr 5S y del ADNr 18S-28S en uno de los berberechos, C.edule y del ADNr 5S en M.galloprovincialis. El tamaño de la unidad de repetición del ADNr 5S en los berberechos varió entre 539-561 pb de las que 120 pb se asignaron al gen. En los mejillones, se distinguen dos tipos de unidades (alfa y beta) definidas por la longitud y secuencia de la región espaciadora. El tamaño de las secuencias alfa varió entre 257-262 pb y el de las beta entre 749-779 pb, asignándose en ambos casos 119 pb al gen 5S. Todas las especies se caractrizan por mostrar un cierto grado de variacion intraindividual, identificándose dos tipos de unidades (A y B) en C.glaucum y C.lamarchi y dos subtipos de secuencias beta (beta1 y beta2) en M.edulis. La variación se detecta mayoritariamente en la región espaciadora. Atendiendo a los parámetros de divergencia y árboles filogenéticos inferidos, C.edule es la especie más divergente, y los tipos A y B de C.glaucum y C.lamarcki secuenicas parálogas originadas en el ancestro de ambos berberechos. En los mejillones, las secuencias alfa indican que M.edulis y M.galloprovincialis son las especies más estrechamente relacionadas, mientras que las secuencias beta parecen reflejar la persistencia de un amplio polimorfismo ancestral. La localización cromosómica del ADNr 5S en C.edule es el telómero del brazo largo de cinco pares cromosónicos, mientras que la del ADNr 18S-28S es el brazo corto de un par heteromórfico. En M.galloprovincialis, el empleo de sondas específicas mostró que las secuencias alfa y beta comparten al menos un locus, pero la existencia de un locus con secuencias beta hace suponer que ambas se originaron por separado. La región ITS de los berberechos abarca 762- 783 pb, y la de los mejillones 942-966 pb. También se detectó un cierto grado de variación intraindividual, principalmente en los espaciadores, pero de menor grado que la observada en el ADNr 5S. El análisis de divergencia y relaciones filogenéticas de las secuencias ITS en berberechos indica que C.edule es la especie más divergente y C.glancum y C.lamarcki las más estrechamente relacionadas, estimándose un tiempo de divergencia de 7,5 m.a., en el primer caso y de 3 m.a., en el segundo. En los mejillones, la región ITS presenta un número insuficiente de caracteres informativos, lo cual podría estar relacionado con fenómenos de introgresión. Por otra parte, se evaluó el potencial de las secuencias analizadas para aportar marcadores moleculares especie-específicos. Las enzimas EcoRV y HaeIII revelan RFLPs de la unidad de repetición del ADNr 5S válidos para la distinción de C.edule y C.glaucum-C.lamarcki. En el ITS, una prueba de PCR basada en el uso de cebadores reversos especie-específicos conduce igualmente a diferenciar C.edule de C.glaucum-C.lamarcki. En los mejillones, no se llegó a reconocer marcadores especie-específicos, debido a que no se detectó toda la variabilidad existente o a las particularidades de los mejillones europeos.