Identificación de tres subtipos de receptores (alfa)1 Adrenérgicos y clonación del subtipo (alfa)1D de ratón

Résumé

Los receptores alfa-1 adrenergicos estan ampliamente distribuidos en tejidos de mamiferos donde se les ha implicado en diversos procesos fisiologicos. Puesto que hasta el momento no se habia realizado ningun estudio sobre los receptores alfa-1 adrenergicos de raton, en la presente tesis doctoral se han desarrollado investigaciones sobre dichos receptores en este organismo, y mas en concreto, sobre el subtipo alfa-1d. Asi, se han clonado fragmentos de dna que codifican para el tercer lazo citoplasmico de tres subtipos de receptores alfa-1 adrenergicos de raton: alfa-1d, alfa-1b y alfa-1c. Asimismo, se ha estudiado la expresion de estos tres receptores en distintos tejidos de raton, encontrandose que para cada receptor existe un patron de expresion diferencial. Tambien se ha aislado y secuenciado un fragmento de dna del tercer lazo citoplasmico del subtipo alfa-1c adrenergico de rata. Aunque la expresion de este receptor no habia podido ser detectada en ningun tejido de este organismo, hemos encontrado que se encuentra ampliamente distribuido. Esta tesis doctoral se ha centrado principalmente en el estudio del receptor alfa-1d adrenergico de raton. Hemos clonado y secuenciado el cdna completo que codifica para este receptor, aislado a partir de una libreria de cdna de cerebro. La secuencia de nucleotidos presenta un marco de lectura abierto de 1686 pb y codifica para una proteina de 562 aminoacidos. Se ha comprobado que el tamaño del rna mensajero del subtipo alfa-1d adrenergico en cerebro es de 3.0 kb. Asimismo,-los analisis de restriccion realizados con dna genomico y con clones aislados de una libreria de dna genomico son consistentes con la existencia de un intron en el gen que codifica para este receptor, localizado en una posicion similar a la descrita en los genes de otros receptores alfa-1 adrenergicos. Por otra parte, se ha construido una proteina fusion formada por la union de la glutation s-transferasa y el tercer