Caracterización del gen "penDE" de "Aspergillus nidulans" y su producto génico, "isopenicilina N aciltranferasa"

Zusammenfassung

Se ha clonado y secuenciado el gen pende de aspergillus nidulans atcc 28901, hongo ascomiceto de la familia eurotiaceae. Dicho gen codifica un enzima implicado en la catalisis de la ultima etapa biosintetica que conduce a la elaboracion de penicilinas hidrofobicas por parte del hongo. El gen estructural se extiende a lo largo de 1241 nucleotidos, y contiene un marco abierto de lectura de 1074 nucleotidos que presenta la insercion de tres intrones en el extremo 5. El enzima codificado, isopenicilina n aciltransferasa, se ha purificado a homogeneidad electroforetica. Se ha comprobado que tiene un peso molecular de 39.800 +- 1.000 da. Presenta una estructura heterodimerica con dos subunidades de 28.5 y 11 kda, respectivamente. El gen pende ha sido expresado en a. Nidulans bajo un promotor constitutivo, consiguiendo un aumento de la actividad aat de hasta 389 veces. Asi mismo ha sido expresado en penicillium chrysogenum, acremonium chrysogenum y escherichia coli.