Desarrollo de anticuerpos monoclonales como sondas citoquímicas para la valoración de semen de morueco

Resumo

En el presente trabajo se obtuvieron diversas líneas de hibridoma mediante fusión celular. De éstas se seleccionaron 17, en función de sus patrones de reconocimiento antigénico en los espermatozoides. Los lugares de reconocimiento antigénico de estos 17 anticuerpos monoclonales(AcM) fueron caracterizados mediante inmunofluorescencia indirecta(IFI) y medante citoquímica con oro coloidal. Las principales regiones reconocidas son: región acrosomal, región postacrosomal, segmento intermendio y segmento principal de la cola. Los lugares de unión de 9 de estos AcM se localizan en la membrana plasmática, y en el resto de los casos en las estructuras intracelulares, como el acromosoma o el citoesqueleto de la cola. Se determinó asimismo la especificidad tisular y de especie de los AcM obtenidos,encontrándose que 4 de ellos reconocen los espermatozoides de modo específico y 2 de éstos muestran especificidad de especie. En cuanto al origen orgánico de los antígenos 12 de ellos se originan en el testículo, 3 en el epidídimo y 2 en las glándulas sexuales accesorias. Los efectos de los distintos protocolos de preparación de las extensiones espermáticas sobre los patrones de reconocimiento antigénico en la IFI fueron también estudiados, encontrándose que la preparación de la muestra es una importante fuente de variación sobre el patrón de fluorescencia obtenido. Los resultados obtenidos fueron discutidos teniendo en cuenta la localización de los diferentes lugares de unión. Las posibles aplicaciones del los AcM estudiados fueron discutidas en función de los resultados obtenidos en las distintas pruebas citoquímicas realizadas. Los AcM que resultaron más interesantes por su especificidad topográfica fueron 10-3F2 y 10-5F1, que marcan la membrana acrosomal externa y la membrana plasmática de la cabeza espermática, respectivamente.