Identificación de los daños producidos por la congelación seminal en la membrana plasmática de espermatozoides de trucha arco iris ("Oncorhynchus mykiss") y optimización de los protocolos de criopreservación

Laburpena

El desarrollo de técnicas de cripreservación seminal específicas es un objetivo de indudable interés en acuicultura. No obstante, a pesar de los esfuerzos realizados, aún no se ha conseguido desarrollar métodos de congelación que permitan obtener tasas de fecundidad lo suficientemente elevadas como para permitir su empleo a escala comercial. Con estos objetivos, se han desarrollado tres series de experimentos. En la primera serie se trató de evaluar diferentes características de la membrana plasmática antes y después de la congelación/descongelación. Las características analizadas fueron: la resistencia de la membrana al estrés osmótico, la composición lipídica de la membrana del espermatozoide y la capacidad fusogénica de los espermatozoides. Para el análisis de la respuesta al estrés osmótico se analizó mediante citometría de flujo, la permeabilidad al ioduro de propidio de espermatozoides expuestos a medios de distinta osmolaridad. Los resultados mostraron que la congelación provoca una importante disminución de la resistencia de los espermatozoides al estrés osmótico. En el segundo experimento, se pretendió determinar los efectos sobre la componente lipídica de la membrana plasmática, colesterol y fosfolípidos. Se analizó la proporción Cho/PL en semen fresco, diluido y criopreservado. La capacidad fusogénica de la membrana plasmática se analizó evaluando la fusión de los espermatozoides, frescos, diluidos y criopreservados con liposomas marcados con fluorescencia. Ninguno de los métodos ensayados consiguió una activación significativa de la capacidad fusogénica del espermatozoide, demostrando que los mecanismos de reconocimiento y fusión con el ovocito son, en trucha, diferentes a los descritos en mamíferos. La dilución en el medio de congelación y, especialmente la cripreservación, inducen una pérdida del control de la capacidad fusogénica de los espermatozoides, ya que un elevado porcen