Comparación de modelos experimentales en el estudio de la enfermedad articular degenerativa

Résumé

Los objetivos generales consistirán en desarrollar diferentes modelos de experimentación en enfermedad articular degenerativa tanto “in vivo” como “in vitro”, para intentar determinar si existe algún modelo experimental superior a los otros, y si con la combinación de modelos aumentamos la precisión de los resultados y la combinación respuesta coste. Los modelos a desarrollar serán: un modelo “in vitro” de degradación de diferentes Ácidos Hialuronicos con especies reactivas de oxigeno (EROs); Modelo de inducción de artrosis mediante sección del Ligamento Cruzado Anterior en Conejo blanco de Nueva Zelanda; Modelo de degradación del Ácido Hialuronico en articulación metacarpofalángica de Caballo hispano-bretón y purasangre ingles; y modelo de generación de lesión condral mediante electrocauterio en rodilla de Oveja Merina. Estudio comparativo mediante modelo “in vitro” de la degradación de diferentes Ácidos Hialurónicos. Mezcla de estos con EDTA y CuSO4, para obtener una reacción de Fenton, e incubación durante 24 horas. Posteriormente se añadirá H2O2 para iniciar la producción de radicales •OH. Las diferentes muestras de AH incubados por 5, 10, 20, 30, 45, 60, 75, 90, y 120 minutos se usaran para análisis en un sistema cromatográfico (HPLC). Estudio de modelo animal en conejo blanco de Nueva Zelanda, mediante inducción de artrosis realizando en unos la sección de LCA y en otros mediante la aplicación intraarticular de MIA. Tras un periodo de 10 semanas, se aplicará tratamiento con AH intraarticular. Transcurridas 2 semanas de la última aplicación de AH, se procederá a la obtención de muestras para estudio mediante cuantificación por citometría de la apoptosis de condrocitos, estudio histológico (Método Túnel) del cartílago, cuantificación de proteoglicanos en líquido sinovial mediante HPLC y cuantificación de niveles de Óxido Nítrico. Estudio de modelo animal en articulación metacarpofalángica de caballo hispano-bretón para valoración de degradación intrarticular de AH. Se realizaran artrocentesis a las 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 y 96 horas después de la administración de AH. Se valorarán por HPLC la concentración y variación de PM a lo largo del tiempo desde la administración. Estudio de modelo animal mediante estudio de la capacidad regenerativa del Condroitín Sulfato asociado a Células Troncales procedentes de tejido adiposo en lesiones articulares de oveja merina. Realizaremos un estudio morfológico mediante la escala de Gross, un estudio por PCR de las cualidades del cartílago neoformado y análisis del Líquido sinovial mediante HPLC, determinando su Peso Molecular y su Concentración. Finalmente realizaremos un análisis mediante PCR de una muestra de tejido de la lesión al sacrificio del animal para diferenciar fibrosis de matriz cartilaginosa normal.