Mejora de la obtención de ovocitos y su evaluación metabólica para los programas de fecundación in vitro de la especie ovina

Abstract

La producción in vitro de embriones presenta múltiples ventajas y su éxito depende en parte de la eficiencia en los métodos de obtención de ovocitos o la mejora de los métodos de selección de ovocitos. Para optimizar las técnicas de obtención de ovocitos se estudiaron, en postmortem, el dispositivo de aspiración, la eficacia de la aspiración selectiva por tamaño folicular y la capacidad de desarrollo in vitro de ovocitos procedentes de distintos tamaños de folículo. Además se estudió la eficacia de distintas técnicas de abordaje laparoscópico (obtención in vivo) que variaban en el número de punciones abdominales, así como la aspiración selectiva por tamaño de folículo in vivo. Con el bojeto de mejorar la selección de ovocitos se realizó un estudio morfológico y morfométrico de los ovocitos y pruebas de metabolismo celular mediante marcaje con isótopos radiactivos. El dispositivo de aspiración que obtiene el mayor número de ovocitos de buena calidad respecto a los folículos puncionados (40-50%) es de flujos de aspiración bajos (10-20 ml/min) y conducciones de grosor fino (1 mm de diámetro interno), no importando el calibre de la aguja. Los ovocitos de folículos mediantos (3-5 mm diámetro) y grandes (>5 mm diámetro) tienen mejor calidad morfológica (ovocitos válidos/100 folículos puncionados: 27,42 y 63% para folículos pequeños, medianos y grandes, respectivamente) y tasas de maduración superiores que los folículos de tamaño pequeño (75,83 y 86% en folículos pequeños, medianos y grandes, respectivamente). La técnica ideal según el número de punciones abdominales para el acceso laparoscópico en función del número de ovocitos respecto a folículos reales (45,7%) y de los tiempos de aspiración por folículo (26,2 segundo) es la que utiliza tres punciones. Los valores obtenidos para una, dos y cuatro punciones son 16,9, 36,3 y 38,6% ovocitos respecto a folículos presentes en el ovari