Caracterización de los genes pcbAB y cefG y análisis de las regiones del genoma A. chrysogenum que contienen los genes pcbC y cefEF implicados en la biosíntesis de cefalosporina C

Résumé

En la presente tesis doctoral se presenta la caracterizacion genetica de la ruta de biosintesis de cefalosporina c en acremonium chrysogenum, incluyendo la clonacion de los genes pcbab y cefg, asi como su secuenciacion y estudios transcripcionales de los mismos. En segundo lugar se resolvieron los ocho cromosomas del hongo anteriormente citado por tecnicas de electroforesis en campo pulsante (chef) y se identificaron los cromosomas en los que se localizaban los genes de biosintesis de cefalosporina c. A continuacion se procedio a la expresion en escherichia coli del gen cefg con el fin de conseguir purificar la proteina correspondiente a dicho gen y asi poder caracterizarla adecuadamente, dada la dificultad de purificarla del hongo. Y por ultimo se procedio a intentar superexpresar el gen cefg bajo promotores de alto nivel de expresion en hongos filamentosos, con el fin de conseguir un aumento de la transcripcion de dicho gen, y de determinar el efecto del incremento del nivel de transcrito sobre la produccion de cefalosporina c. Finalmente se realizaron estudios comparativos, a nivel de transcripcion, de la expresion de los distintos genes implicados en la biosintesis de cefalosporina c.