Tuberculosis animal en la España atlánticadescripción de la enfermedad en determinados hospedadores domésticos y silvestres que participan en la epidemiología de la infección

Resumen

Introducción El complejo Mycobacterium tuberculosis (MTC) incluye las especies del género Mycobacterium más relevantes desde el punto de vista sanitario. La erradicación de la tuberculosis en el ganado bovino es un objetivo sanitario prioritario en la Unión Europea, por el carácter zoonósico de la enfermedad y por la implicación sanitaria y económica que tiene para el sector ganadero. Para conseguir la erradicación de la enfermedad, se precisa más información sobre la patogenia, el diagnóstico y la epidemiología de la infección, entre otras cuestiones. En la España atlántica, los valores de prevalencia de tuberculosis en rebaños bovinos se mantienen próximos a la erradicación. Sin embargo, en la última década la progresión es lenta, por lo que se precisa profundizar en aspectos que directa o indirectamente pudiesen impulsar avances. El estudio de la tuberculosis en la interfaz entre ganado doméstico, fauna silvestre y medio ambiente en la España atlántica presenta particularidades concretas e implica a una comunidad de hospedadores determinada, que incluye a especies no estudiadas en profundidad en esta área. En concreto, nos referimos a la especie ovina, que convive con un tercio de los rebaños bovinos de Galicia (por citar un área de referencia en la España atlántica); al jabalí (Sus scrofa), que se ha determinado como el principal hospedador silvestre de la tuberculosis en el centro-sur de la península ibérica, pero del que se desconoce su estatus sanitario en esta área; y al tejón (Meles meles), que presenta una prevalencia elevada de la infección en países europeos con características ecológicas y ambientales similares, pero del que existe escasa información sanitaria en la España atlántica. Los objetivos globales de esta tesis doctoral, se orientan a estudiar si determinadas especies domésticas y silvestres pueden ser hospedadoras de tuberculosis en la España atlántica, evaluar en ellas la utilización de técnicas rutinarias para el diagnóstico de la enfermedad y profundizar en las relaciones epidemiológicas en la interfaz entre ganado doméstico, fauna silvestre y medio ambiente. Contenido de la tesis Para alcanzar los objetivos de esta tesis doctoral, se han realizado diferentes estudios que han derivado en 4 trabajos, que se han distribuido en 3 Capítulos: Capítulo 1. Descripción de la infección natural de tuberculosis en la especie ovina. Evaluación de técnicas diagnósticas, cuadro lesional e histopatológico y epidemiología de la infección. Trabajos derivados: • Tuberculosis causada por Mycobacterium bovis y Mycobacterium caprae en ovinos. Publicado en The Veterinary Journal 2012, 191:267-269. • La especie ovina como potencial fuente de tuberculosis: epidemiología, patología y evaluación de las técnicas diagnósticas. Publicado en Transboundary and Emerging Diseases 2015, doi: 10.1111/tbed.12325. El primer trabajo se diseñó para confirmar y describir la infección natural causada por MTC en tres rebaños ovinos infectados por M. bovis y M. caprae (dos de ellos por M. bovis y uno por M. caprae), que habían convivido con ganado bovino y/o caprino infectado. El hallazgo de estos 3 rebaños afectados por la infección natural fue posible, en dos casos, gracias a la detección de lesiones compatibles en matadero y, en el otro caso, gracias a la investigación epidemiológica realizada tras la detección de sintomatología clínica compatible en un rebaño ovino que convivía con ganado caprino infectado. Se confirmó la infección mediante técnicas de histopatología, cultivo bacteriológico y análisis molecular, aislándose el agente patógeno en el 50 % de las muestras sometidas a cultivo bacteriológico. Se detectaron lesiones macroscópicas y microscópicas, principalmente en cavidad torácica y en linfonodos retrofaríngeos. Los perfiles moleculares descritos a partir de los aislados obtenidos, fueron los mismos que se habían detectado previamente en las especies domésticas que habían convivido con estos ovinos. Los resultados confirmaron que la especie ovina es susceptible a la infección por MTC, cuando existe una relación epidemiológica directa o indirecta con ganado bovino o caprino infectado, es decir, cuando existe contaminación de dicho patógeno en el medio. El segundo trabajo de este Capítulo, investigó a mayor escala la epidemiología de la tuberculosis en los ovinos, estableció la distribución de lesiones en animales afectados por la enfermedad, describió la histopatología de las lesiones causadas y evaluó las técnicas diagnósticas rutinarias respecto a su potencial aplicación en rebaños ovinos que cohabiten con rebaños bovinos y/o caprinos infectados. Los resultados de este trabajo demostraron que un elevado porcentaje de los rebaños de ovinos objeto de estudio, se encontraban infectados por MTC, siendo los perfiles moleculares descritos a partir de los aislados obtenidos los mismos que se habían detectado previamente en las especies domésticas infectadas con las que convivían, habían convivido o estaban relacionadas epidemiológicamente. Respecto al establecimiento de la distribución de lesiones en los animales afectados, la mayoría de los ovinos presentaban lesiones en el aparato respiratorio, siendo los linfonodos bronquiales y mediastínicos los más afectados, manifestándose una distribución lesional similar a la propuesta previamente para los bovinos. Valorando la descripción histopatológica de las lesiones causadas por la tuberculosis en ovinos, se concluyó que la clasificación histopatológica de lesiones propuesta para bovinos y caprinos es válida también para ovinos. El estudio de las lesiones histopatológicas encontradas sugiere que, pese a que existe un alto grado de prevalencia en los rebaños estudiados, la infección no progresa rápidamente en esta especie, lo que contrasta con las observaciones de lesiones más severas y difusas detectadas en bovinos y caprinos. Destaca la baja carga bacilar detectada mediante técnicas de inmunohistoquímica y a través del uso de la tinción de Ziehl-Neelsen. En lo referente a la evaluación de las técnicas diagnósticas habituales (IDTBS, IFN-¿ y ELISA), todas fueron utilizadas con éxito en este estudio, aunque no sin limitaciones. La IDTBS presentó una sensibilidad algo más limitada en comparación con otros estudios previos realizados en ovinos, pero los valores aumentaron según se incrementó la severidad de las lesiones. Además, las técnicas de IDTBS y ELISA presentaron una baja especificidad (probablemente explicada debido a la co-infección con paratuberculosis en determinados rebaños), y el porcentaje de animales positivos a la prueba de IFN-¿ fue bajo en relación a la positividad detectada utilizando IDTBS. No obstante, se puso de manifiesto nuevamente la asociación entre respuesta inmunológica y severidad de las lesiones de tuberculosis, hecho que ya se había demostrado previamente en vacuno y caprino. Los resultados de este Capítulo evidenciaron la necesidad de considerar el papel de esta especie doméstica en la epidemiología de la tuberculosis animal en la España atlántica. Capítulo 2. Descripción de la infección natural de tuberculosis en el tejón (Meles meles) en la España atlántica. Prevalencia, uso de técnicas diagnósticas, patología e información previa sobre la epidemiología de la infección. Trabajo derivado: • Infección de tejones (Meles meles) con Mycobacterium bovis y Mycobacterium avium complex en España. Publicado en The Veterinary Journal 2011, 190(2):e21-25. Este trabajo confirmó la infección natural de tuberculosis en el tejón en la España atlántica. Se investigó la presencia y la prevalencia de MTC y MAC, se llevó a cabo un estudio de las lesiones detectadas y se avanzó en el conocimiento de la epidemiología de la tuberculosis en esta especie. Como resultado, se confirmó la presencia de infecciones producidas por micobacterias en el tejón en la España atlántica, con una prevalencia de MTC del 6,6 % (en tejones necropsiados muertos por atropellos) y del 0 % (en tejones trampeados), identificando cuatro aislados diferentes de M. bovis. Respecto a MAC, la prevalencia fue del 6,6 % (en tejones atropellados) y del 2,8 % (en tejones trampeados), siendo negativos todos los cultivos y PCR específicos para Map, pese a la alta prevalencia de paratuberculosis detectada en los bovinos del área. En lo referente a las lesiones detectadas, respecto a MTC, los hallazgos de este estudio orientan a la cavidad torácica como la región anatómica con mayor evidencia de lesiones descritas por M. bovis, lo que induce a pensar en una vía aerógena de infección. En lo relativo al examen histopatológico, se detectaron lesiones que se identificaron con estadios primarios o iniciales de la infección y que se describieron como pequeños granulomas en las paredes alveolares del pulmón, linfonodos traqueobronquiales y mediastínicos. Se detectaron lesiones microscópicas compatibles con tuberculosis en todos los animales que presentaron cultivo positivo y también en determinados animales con cultivo negativo. Así, la combinación de datos bacteriológicos e histopatológicos, incrementó los valores de prevalencia de MTC de un 6,6 % a un 12,4 %. En lo referente a las lesiones microscópicas compatibles con MAC, se describieron pequeños granulomas en pulmón y linfonodos retrofaríngeos, submandibulares, traqueo-bronquiales, mediastínicos y mesentéricos, solo distinguibles de los granulomas tuberculosos mediante la utilización de técnicas de inmunohistoquímica. En cambio, no se detectaron lesiones granulomatosas compatibles con paratuberculosis ni en intestino ni en ganglios mesentéricos. Respecto a los avances en el conocimiento de la epidemiología de la tuberculosis en esta especie en la España atlántica, tras el espoligotipado de los aislados obtenidos en los tejones infectados, se confirmó que estos se correspondían con espoligotipos comunes y previamente identificados en ganado bovino infectado y residente en el área donde se localizaron los tejones analizados, no obstante se precisarían más investigaciones para conocer en profundidad el papel epidemiológico de esta especie en la España atlántica. Capítulo 3. Descripción de la infección natural de tuberculosis en el jabalí (Sus scrofa) en la España atlántica. Prevalencia, uso de técnicas diagnósticas, patología y epidemiología en la interfaz entre ganado doméstico, fauna silvestre y medio ambiente. Trabajo derivado: • Tuberculosis en el jabalí en la España atlántica: un panorama diferente respecto a los hábitats mediterráneos. Publicado en BMC Veterinary Research 2013, 9:176. En este trabajo se confirmó la infección natural de tuberculosis en el jabalí en la España atlántica, y se documentó la prevalencia de MTC y MAC en esta especie (y en la fauna silvestre presuntamente susceptible que cohabita en esta área de estudio), mediante técnicas diagnósticas serológicas, patológicas, bacteriológicas y moleculares. También se identificaron asociaciones entre poblaciones infectadas de jabalíes, animales domésticos y otras especies silvestres, y se establecieron vínculos epidemiológicos y espaciales entre aislados de MTC de animales domésticos y silvestres de áreas concretas. Se observó que la prevalencia de MTC en jabalí es baja en la España atlántica (2,59 % por cultivo y 2,08 % por serología), no obstante, en Asturias gracias a la combinación de técnicas bacteriológicas e histopatológicas se alcanzó una prevalencia regional de MTC del 12,85 %. La prevalencia de MAC fue del 4,55 % (superior a la de MTC), detectándose una elevada proporción de M. avium subsp. hominissuis. Respecto a MTC, se detectaron lesiones generalizadas en un 16,7 % de los animales con algún tipo de lesión, siendo la mayoría de ellas de pequeño tamaño y circunscritas fundamentalmente a los linfonodos submandibulares; confirmándose como positivas un 8,57 % de las lesiones detectadas. En los jabalíes infectados por MAC, las lesiones microscópicas fueron indistinguibles de las causadas por MTC, salvo mediante la utilización de técnicas de inmunohistoquímica. También hay que destacar que la concordancia entre el cultivo y los resultados del ELISA fue buena. Epidemiológicamente, se identificó M. bovis y M. caprae en los aislados de jabalíes de la España atlántica, caracterizando seis espoligotipos diferentes, cinco de los cuales habían sido previamente aislados en bovinos, ovinos, caprinos y zorros (Vulpes vulpes) del área de estudio. Uno de los espoligotipos no había sido caracterizado nunca en ninguna especie doméstica o silvestre de Galicia o de Asturias. También se establecieron vínculos epidemiológicos gracias a la realización de análisis moleculares MIRU-VNTR de aislados de animales domésticos y silvestres de las mismas áreas. En resumen, el jabalí se confirmó como hospedador de tuberculosis en la España atlántica, y su papel en la epidemiología de la infección podría cambiar en base a factores de riesgo locales, como el incremento de la tuberculosis en los animales domésticos, abundancia de fauna silvestre y cambios en el uso del suelo, por lo que la vigilancia sanitaria en esta especie debe ser sostenida en el tiempo. Conclusiones PRIMERA.- La especie ovina es susceptible a la infección por MTC, incluyendo tanto M. bovis como M. caprae. La distribución de las lesiones y la descripción histopatológica de las mismas, es similar a la previamente descrita para bovino y caprino, sugiriendo que los ovinos infectados tienen el potencial de transmitir el agente patógeno. En consecuencia, esta especie debería ser vigilada y manejada igual que los demás rumiantes domésticos si forma parte o tiene relación con unidades epidemiológicas infectadas de tuberculosis. SEGUNDA.- Las características histopatológicas de las lesiones tuberculosas del ganado ovino infectado indican que la enfermedad no progresa rápidamente en esta especie, lo que contrasta con las observaciones realizadas en bovinos y caprinos. TERCERA.- El tejón se confirma como hospedador de M. bovis en la España atlántica, presentando lesiones que sugieren una vía de infección aerógena y estadios generalmente iniciales de la enfermedad. CUARTA.- El jabalí se confirma como hospedador de M. bovis y M. caprae en la España atlántica. Tanto la prevalencia de infección como la proporción de jabalíes infectados con lesiones generalizadas son inferiores a las descritas en ambientes mediterráneos. QUINTA.- Determinados aislados de M. bovis obtenidos en tejón, y de M. bovis y M. caprae obtenidos en jabalí, son comunes a los del ganado local. No obstante, el papel epidemiológico del tejón y del jabalí en la España atlántica requiere más investigaciones. SEXTA.- Para maximizar la sensibilidad en el diagnóstico post mortem de las especies objeto de investigación en esta tesis (especie ovina, jabalí y tejón), es recomendable combinar los análisis bacteriológicos con el examen histopatológico e inmunohistoquímico. SÉPTIMA.- Las pruebas diagnósticas in vivo basadas en la respuesta inmune de base celular demuestran baja sensibilidad en ovinos. No obstante, esa sensibilidad aumenta con la severidad de las lesiones. A pesar de ello, para el diagnóstico de campo se recomienda el uso de la intradermotuberculinización simple (IDTBS) en combinación con una prueba de base humoral, el inmunoenzimoensayo (ELISA), por su favorable relación coste-beneficio. La prueba del gamma interferón (IFN-¿), también de base celular, quedaría reservada como herramienta complementaria. OCTAVA.- La comunidad de hospedadores que contribuye al mantenimiento de MTC en la España atlántica es compleja. Incluye tanto al ganado bovino, caprino y ovino como al jabalí y al tejón, siendo importante tener en consideración las interacciones entre especies. Para el control de la tuberculosis en sistemas complejos es necesario tener en cuenta a todos los hospedadores implicados, empleando para ello todas las técnicas diagnósticas y herramientas de lucha a nuestro alcance. 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