Optimización de una vacuna atenuada "aroA" de "Aeromonas hydrophila" para peces

Abstract

En esta Tesis Doctoral se ha profundizado en la caracterización de un mutante atenuado aroA del pátogeno Aeromonas hydrophila, para ser utilizado como una vacuna viva en peces. Se estudió el comportamiento de este mutante atenuado, tanto in vivo como in vitro, mediante diferentes técnicas microbiológicas (tests bioquímicos, cultivos in vitro bajo diferentes condiciones, métodos de detección por PCR, microscopía electrónica de barrido y confocal, estudio y cuantificación de factores de virulencia, producción de moléculas de quorum sensing, etc.). También se analizaron las condiciones de vacunación para la optimización de vacuna, tanto en cuanto a la preparación del inóculo vacunal, como a la dosis y ruta de administración, caracterizando la eficacia protectora de la vacunación frente a patógenos homólogos y heterólogos (A.salmonicida y Yersinia ruckeri) en truchas arco iris (Oncorhynchus mykiss) y carpines (Carassius auratus). Finalmente, se estudiaron distintos parámetros de las respuestas inmunitarias específicas e inespecífica inducidas por la vacunación en O.mykiss. La inactivación del gen aroA compromete muchas cualidades metabólicas y fenotípicas de la cepa mutante aroA, implicadas en su supervivencia y mecanismos de virulencia, sin afectar significativamente a su inmunogenicidad. La cepa mutante es más sensible a distintos estreses ambientales (osmótico, oxidativo, térmico, falta de nutrientes) que su homóloga silvestre, y sobrevive un menor tiempo en el agua, medio al que es potencialmente liberada durante o tras la vacunación, lo que contribuye a la seguridad de la vacuna. Por otra parte, esta cepa mutante retiene la capacidad de responder a moléculas de quorum sensing y de formar biofilms sobre diversos materiales plásticos y sobre el pienso para peces. Además, se comprobó que la utilización de distintos medios de cultivo influye también sobre su supervivencia in vitro e in vivo, y modula