Eliminación de neospora caninum en el semen bovino y evaluación del semen como vía de transmisión

Resumo

La presente memoria de tesis tuvo por objetivos: 1) investigar la presencia de N. caninum en semen y sangre; y el desarrollo de anticuerpos específicos e IFN-gamma en toros infectados y reinfectados experimentalmente y 2) investigar la capacidad infectante de los taquizoitos de N.caninum incluidos en semen y administrados in útero mediante IA a novillas y vacas. Para ello se diseñaron y realizaron cuatro experimentos: 1. Infección experimental de sementales bovinos: Se infectaron ocho toros con 10elevado a 8 taquizoítos del aislado NC-1 de N.caninum. La presencia de ADN de N.caninum en semen y sangre se detectó mediante una técnica de PCR anidada. La respuesta de anticuerpos específicos e IFN-gamma se estudió mediante ELISA. Todos los toros infectados mostraron ADN de N. caninum en semen y sangre en algún momento durante el curso del estudio. La eliminación de ADN de N.caninum en el semen fue intermitente, posterior a la parasitemia y asociada a la fase crónica de la infección. En las muestras de semen positivas, solo se detectó ADN de N.caninum en la fracción celular y no en el plasma seminal. La carga parasitaria, determinada mediante una técnica de PCR cuantitativa, varió entre 0,1 y 14,5 (media 6,0) parásitos/ml de semen. Las muestras de semen positivas se inocularon a ratones BALB/c nu/nu, pero no se pudo aislar al parásito. Todos los toros desarrollaron una respuesta mesurable de anticuerpos séricos específicos (IgM, IgG, IgG1 e IgG2) e IFN-gamma. Además, se detectó IgG en el plasma seminal de todos los animales infectados. 2. Reinfección experimental de sementales bovinos: Se reinfectaron tres toros del experimento anterior con 10elevado a 8 taquizoítos de N.caninum (aislado NC-1). En todos los toros reinfectados se detectó ADN de N.caninum en muestras de semen y sangre. La eliminación de ADN de N.caninum en semen fue, como en la infección primaria, intermitente. La carga parasitaria varió entre 0,1 y 15,6 (media 4,41) parásitos/ml de semen. Las muestras de semen positivas fueron inoculadas en ratones BALB/c nu/nu, aunque no se detectó ADN de N.caninum en cerebro y tejidos de los roedores inoculados. Además, se inseminaron novillas con una mezcla de las muestras de semen recogidas de los toros infectados, pero no seroconvirtieron. En los toros reinfectados la respuesta específica de IgM, IgG, IgG1, IgG2 séricos; IgG en plasma seminal e IFN-gamma plasmática, fue más temprana y de mayor magnitud que la observada en los toros después de la infección primaria. 3. Inoculación intrauterina de novillas con semen contaminado con taquizoítos de N. caninum: Se utilizaron 18 novillas, nueve de ellas fueron inseminadas con semen que contenía 10elevado a 7 taquizoítos de N.caninum (aislado NC-1), que seroconvirtieron y mostraron una respuesta específica de IFN-gamma. Además, se detectó ADN de N.caninum en las muestras de sangre de todas ellas y en cerebro, pulmón, hígado y cuerno uterino de algunas. Las nueve novillas restantes, inseminadas con semen no contaminado con taquizoítos de N.caninum no seroconvirtieron ni se detectó IFN-gamma o ADN del parásito en sangre y órganos. La tasa de gestación fue menor en las novillas infectadas (11%) que en las testigo (66%). 4. Titulación de la dosis infectante: Cinco grupos de novillas se inseminaron con semen contenido 0 (testido), 10elevado a 2, 5x10elevado a 3, 5x10elevado a 4 y 5x10elevado a 5 taquizoítos de N.caninum (aislado NC-1). Se observó un efecto dosis-respuesta, mostraron solo seroconversión persistente algunas novillas inseminadas con 5x10elevado a 3 o más taquizoítos del parásito. La tasa de gestación en el grupo testigo (60%) fue mas alta que en las novillas inoculadas (0-42,9%). Además, esta fue menor cuando la dosis de taquizoítos aumentaba (42,9%, 12,5%, 11,1% y 0%, respectivamente). En paralelo, cuatro grupos de vacas adultas multíparas con problemas de infertilidad de diversa etiología se inseminaron con semen contenido 0 (testigo), 10elevado a 2, 5x10elevado a 3 y 5x10elevado a 5 taquizoítos de N.caninum (aislado NC-1). Solo seroconvirtió una vaca inseminada con 5x10elevado a 5 taquizoítos. Estos son los primeros estudios que describen la presencia de ADN de N.caninum en semen y sangre de todos infectados y reinfectados experimentalmente; y la posibilidad de la transmisión venérea experimental en la neosporosis bovina.